HIV-I構成蛋白やセレン含有蛋白の翻訳に必須な新規RNA結合因子の探索

寻找翻译HIV-1组成蛋白和含硒蛋白所必需的新型RNA结合因子

• 批准号: 07808068
• 负责人: 高橋 和彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07808068/
• 关键词: セレン; RNA結合因子; 翻訳; グルタチオンペルオキシダーゼ

Secは終止コドンUGAでコードされているが,真核生物におけるSecの取り込み機構は現在不明である.Sec含有蛋白のmRNA3′UTRには,stem-loop構造をとり得る配列が存在しており,この構造内にSecの取り込みに必須と考えられる配列(Sec insertion sequence;SECIS)が共通して認められる.今回,我々はこのSECISを含むmRNA3′UTRに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA3′UTR全長213baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い,オートラジオグラフィーにより解析したところ,約50KDaの位置に単一のバンドが検出された.また,stem-loop部分単独89baseを用いた場合にも同じ位置に単一のバンドが認められた.これらの結果より、細胞質に3′UTRのstem-loop部分と特異的に結合する因子の存在することが初めて示唆された.検討したうち最もSECIS RNA結合蛋白含量の多いラット肝細胞質を出発材料として本因子の精製を試みた.まず末端をbiotin化したRNAを合成し、これを出発材料と反応した.その後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子を分離した.現在,分析スケールから精製スケールに試料を大量に処理しており,精製に成功したら,その生化学的性質を調べる予定である.

The Sec gene has not been detected in the UGA gene. The eukaryotic gene Sec gene has been found to be unknown. The SEC contains the protein mRNA3'UTR gene, and the stem-loop gene has been found to contain the protein. There is an error in the configuration of the stem-loop gene, so it is necessary to test the Sec insertion sequence;SECIS of the internal Sec gene. This time, our SECIS contains a combination of mRNA3'UTR and cell factors. SEC contains protein, cell, cell The reverse UV irradiates the SDS-PAGE line, and the location of the 50KDa position is not clear. For example, in the stem-loop section, you can use the word "89base" to match the location of the same location. The results showed that there was a significant difference in the combination factor of some of the specific characteristics of loop. The most sensitive SECIS RNA binding protein content was determined by Elisa. The liver cell culture material was tested by this factor. The end of the biotinization, the RNA synthesis, and the output of the material. After treatment, the avidin does not dissolve the RNA binding factor. Now, there is a lot of information about the nature of biochemistry, such as the success of the analysis and the prediction of biochemical properties.

项目成果

K.Takahashi: "Callular Glutathione Peroxidase" Human Protein Data. 2. (1995)

K.Takahashi：“Callular 谷胱甘肽过氧化物酶”人类蛋白质数据。

Y.Yamamoto: "Enzmyme-Linked Immunosorbent Assay for Extracellular Glutathione Peroxidase." Clin.Chem.Acta. 236. 93-99 (1995)

Y.Yamamoto：“细胞外谷胱甘肽过氧化物酶的酶联免疫吸附测定。”

高橋和彦: "ヒト細胞外型グルタチオンペルオキシダーゼの構造と機能" フリーラジカルの臨床. 9. 124-130 (1995)

Kazuhiko Takahashi：“人细胞外谷胱甘肽过氧化物酶的结构和功能”自由基诊所。9. 124-130 (1995)

K.Takahashi: "Extracellular Glutathione Peroxidase" Human Protein Data. 2. (1995)

K.Takahashi：“细胞外谷胱甘肽过氧化物酶”人类蛋白质数据。