必須微量元素セレン・トランスポーター受容体の同定と取り込み機構の解析

必需微量元素硒转运蛋白受体的鉴定及摄取机制分析

• 批准号: 16659033
• 负责人: 高橋 和彦
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Hokkaido Pharmaceutical University School of Pharmacy (2005)Hokkaido University (2004)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659033/
• 关键词: セレン; 必須微量元素; トランスポーター; セレノプロテインP

Seトランスポーターの運搬・取り込み機構の解析Jurkat細胞に可変量の放射標識SePを加え,4℃で1時間反応した.反応終了後,細胞への結合量を測定し,スキャッチャードプロットを行った.その結果,SePに対する受容体の数は2,200±1,500per cell (n=4,mean±SEM),解離定数Kdは0.67±0.33nMと求められた.また,放射標識SePとJurkat細胞を反応後,架橋試薬を加えた試料についてSDS-PAGEとオートラジオグラフィで解析を行い,SeP受容体の存在を調べた.その結果,架橋試薬disuccinimidyl suberateと反応した場合,試薬無しで見られた66KDaのバンド(SePに由来)は消失し179KDaのバンドが新たに出現した.500倍量の非標識SePを共存するとこのバンドは消失することから,この反応が特異的であることが確認された.両者の差,すなわち110KDaのSeP受容体の存在が示された.SePがJurkat細胞にSeを供給していることを確かめるため,細胞と放射標識SePを37℃で3日間培養後,細胞内のSe含有蛋白質の新規合成が行われているかSDS-PAGEとオートラジオグラフィで解析を行った.55,23,20及び15kDaのバンドが認められ,これらのバンドが抗SeP抗体で免疫沈降されないことから,新規Se含有蛋白質の合成が確認された.以上の結果から,SeP受容体の存在とSePがこの受容体を介して細胞内にSeを供給していることが証明された.SeP受容体の同定の試みSeP不溶化カラムにJurkat細胞膜画分を添加後,結合物の回収・分析を試みた.しかし,構造解析などの分析に十分な量の試料を確保することが出来なかった.今後,より多量の膜画分を用いるなど工夫を加えて,最終的にSeP受容体の同定を目指す予定である.

Se equipment transfer machine analysis of Jurkat cell quantifiable radiation label SeP increase, 4 ℃ for 1 time anti-aging. After the counter-test, the cell volume is combined with the measurement, so that you can make sure that you are in good condition. The results show that the number of SeP capacitors is 2200 ±1500per cell, and the number of dissociation Kd is 0.67 ±0.33nM. After the SeP Jurkat cell is recognized by the radiation tag, the SeP acceptor will be analyzed by adding the material to the SeP acceptor. The results show that the results show that the disuccinimidyl suberate does not match, and the SeP causes the 179KDa to disappear. The new 179KDa is found. 500 times the value of the unmarked SeP coexist, the data disappears. The message is confirmed. There is a difference in the value of the 110KDa SeP receptor. The cell Se of the Sep Jurkat cell is supplied to the cell to make sure that the SeP is incubated at 37 ℃ for 3 days. After incubation at 37 ℃ for 3 days, the intracellular Se contains proteins in the cell. The synthesis of the protein in the cell, the synthesis of the protein, the synthesis of the protein, the synthesis of the SDS-PAGE, the protein analysis, the resolution, the analysis, the detection, the analysis, the analysis, the detection, the analysis, the analysis, the analysis and analysis, the results showed that the Se contained proteins in the cells after incubation at 37 ℃ for 3 days. 5. The anti-SeP antibody was immunized with anti-Se antibody. The new Se contains protein, synthesis and confirmation. The above results show that the SeP receptor has a SeP receptor, the intracellular Se is supplied to the receptor, and the Sep receptor is the same as the SeP insolubilizer. After the cell membrane painting analysis is added, the combination analysis is performed. Make an analysis, make sure that you can make sure that you are out of business. From now on, we will use a lot of time to increase the volume of the film painting, and the most accurate SeP acceptor is the same as the predetermined one.

项目成果

Selenoprotein expression in Hurthle cell carcinomas and in the human Hurthle cell carcinoma line XTC.UC1.

Hurthle 细胞癌和人 Hurthle 细胞癌细胞系 XTC.UC1 中硒蛋白的表达。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Thyroid 15
• 作者: Sawada;H.;Akasaka;M.;Yokota;N.;Sakai;N.;M.Menth
• 通讯作者: M.Menth

Bone metabolism and oxidative stress in postmenopausal rats with iron overload

• DOI: 10.1016/j.tox.2003.12.006
• 发表时间: 2004-04-15
• 期刊: TOXICOLOGY
• 影响因子: 4.5
• 作者: Isomura, H;Fujie, K;Sakamoto, W
• 通讯作者: Sakamoto, W

Domain structure of bi-functional selenoprotein P

• DOI: 10.1042/bj20040328
• 发表时间: 2004-08-01
• 期刊: BIOCHEMICAL JOURNAL
• 影响因子: 4.1
• 作者: Saito, Y;Sato, N;Takahashi, K
• 通讯作者: Takahashi, K

Selenoprotein P, as a predictor for evaluating gemcitabine resistance in human pancreatic cancer cells

• DOI: 10.1002/ijc.20304
• 发表时间: 2004-11-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF CANCER
• 影响因子: 6.4
• 作者: Maehara, S;Tanaka, S;Maehara, Y
• 通讯作者: Maehara, Y

Relationship of coffee consumption with risk factors for atherosclerosis in rats.

咖啡摄入量与大鼠动脉粥样硬化危险因素的关系。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Ann.Nutr.Metab. 49
• 作者: Kubota;K.et al.;Kobayashi T et al.;W.Sakamoto
• 通讯作者: W.Sakamoto