21番目のアミノ酸の翻訳に関与する新規RNA結合因子の研究

参与第 21 个氨基酸翻译的新型 RNA 结合因子的研究

• 批准号: 08680644
• 负责人: 高橋 和彦
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680644/
• 关键词: セレン; RNA結合因子; 翻訳; グルタチオンペルオキシダーゼ; セレノシステイン

セレノシステイン(Sec)はmRNAの読み取り枠内の終止コドンUGAでコードされており,翻訳され得る21番目のアミノ酸である.真核生物では,どのようなメカニズムでSecが取り込まれるかは現在,不明である.Sec含有蛋白のmRNAの3′-非翻訳領域にstem-loop構造をとり得る特異配列(Sec insertion sequence ; SECIS)が認められ,この配列の存在がUGAをSecとして取り込むために必要なことが示されている.今回,我々はこのSECISに結合する細胞質因子の検索を行った.Sec含有蛋白であるヒト細胞質型グルタチオンペルオキシダーゼ(cGPx)のmRNA stem-loop部分89 baseを^<32>Pで標識し,CHO細胞の細胞質画分と反応させた.この反応物にUVを照射してSDS-PAGEを行い、オートラジオグラフィーにより解析したところ,約55KDaの位置に単一のバンドが検出された.しかし,フリーに対する複合体の割合は著しく低かった.そこで他の種々Sec含有蛋白のSECISのついてゲルシフト法で解析を行った.その結果,ヒト血漿セレン含有蛋白Selenoprotein P (SeP)のSECISをプローブとした場合最も強い結合活性が認められた.現在,biotin化したSePのSECISを合成し,これを出発材料と反応後,avidinを不溶化したアガロースと反応し,目的とするRNA結合因子の分離を試みている.この精製に成功したら,その生化学的性質を調べ,遺伝子をクローニングし構造を決定する予定である.

The expression of UGA in the mRNA of Sec was changed to 21-fold. In eukaryotes, Sec contains a protein mRNA and a 3′-non-inverted domain.Sec insertion sequence (SECIS) is recognized as a necessary sequence for the existence of UGA. In this paper, we present the SECIS binding to the cytoplasmic factor expression system.Sec contains protein, cytoplasm-type protein, cGPx mRNA stem-loop portion 89 base<32>,CHO cytoplasm-type protein. The UV irradiation of the reaction substance was carried out in SDS-PAGE, and the separation was carried out at a position of about 55KDa. The complex is divided into two parts. The analysis of SECIS, which contains protein, is carried out by the method of analysis. As a result, the protein Selenoprotein P (SeP) in the plasma was found to have the strongest binding activity. Now,biotin is converted into SeP and SECIS, and after the release of the material and reaction,avidin is not dissolved. With the success of this refinement, the biochemical properties of the system are adjusted, and the structure of the genetic code is determined.

项目成果

毛利 祐子: "セレノシステイン(Sec)含有蛋白質のmRNA 3′UTRに結合する細胞質因子の検索" 第69回日本生化学会第19回日本分子生物学会合同年会講演要旨集. 462-462 (1996)

森裕子：“寻找与含硒半胱氨酸（Sec）的蛋白质的mRNA 3UTR结合的细胞质因子”第69届日本生化学会年会和第19届日本分子生物学会年会摘要日本。462-462（1996）