必須微量元素セレンを運搬する蛋白質の同定と運搬機構の解析

必需微量元素硒转运蛋白的鉴定及转运机制分析

• 批准号: 12878113
• 负责人: 高橋 和彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878113/
• 关键词: セレン; 必須微量元素; 細胞増殖

Jurkat細胞の培養に用いられる無血清培地には,Seが亜セレン酸ナトリウムの形で添加されており,Seの添加は細胞,特に免疫系や神経系の細胞の生存維持に必須である.一方,血清添加培養ではSeの添加が不要なことから,血清中にはSeを運搬して細胞にSeを供給する因子が存在すると予想された.これまでの研究から,ヒト血清には2種のSe含有蛋白質が存在することが分かっていたので,このうちいずれがSe運搬作用を有するか欠乏血清を用いて同定した.これらの欠乏血清存在下にJurkat細胞を培養し,いずれの欠乏血清で細胞がSe欠乏になるかを調べた.細胞のSe含量や細胞内のSe含有酵素の活性を測定したところ,Selenoprotein P(SeP)欠乏血清を用いて培養した細胞の場合のみSe含量,cGPx活性,チオレドキシン還元酵素活性の低下が認められたSe欠乏細胞をSePを再添加したSeP欠乏培地で培養し,cGPx活性を測定したところ,添加したSePの濃度に依存したcGPx活性の回復が認められた.以上の研究から,SePがSe運搬蛋白質であることが明らかになった.Se運搬蛋白質を同定できたので,次に細胞への結合様式,取り込み機構について研究を行った.Se75を添加した培地で肝細胞腫Hep-G2を培養し,放射標識SePを培養上清から回収した.抗体を不溶化したカラムを用いて,放射標識SePを調製した.Jurkat細胞に可変量の放射標識SePを加え,細胞への結合量を測定し,スキャッチャードプロットから,受容体数,解離定数を求めた.Jurkat細胞上の受容体数は2,200,解離定数は0.67nMであった.また,放射標識SePと細胞を反応後,架橋試薬を加え,SDS-PAGEで解析したところ,分子量100KのSeP結合分子の存在が明らかになった.

Jurkat cell culture is serum-free, Se cell culture is serum-free, cell culture is serum-free. On the one hand, the serum was added with Se, and the Se in the serum was added. The cell Se was supplied to the trophoblast factor. In this study, we found that Se contains protein in serum, and that there is no protein in serum. There is no difference between serum and Se. In the presence of serum deficiency, Jurkat cells were cultured, serum was deficient, Se was deficient, Se was deficient. The content of Se in the cell, the activity of enzyme in the cell, the activity of enzyme in the cell, the lack of serum in Selenoprotein P (SeP), the content of Se, the activity of cGPx, the activity of enzyme, the content of enzyme, the content of enzyme, the activity of enzyme, the content of enzyme, the activity of cell, the content of enzyme, the content of enzyme, the activity of cell, the content of enzyme, the activity of Se, the activity of cell, the activity of SeP, the content of enzyme, the content of enzyme, the activity of SeP and the activity of SeP. Add "SeP" degree dependent "cGPx activity" back to "temperature". In the above study, SeP Se protein transfer assay showed that the protein transfer test showed that the protein transfer test was the same as that of the control group, and the combination formula of the secondary protein transfer assay was used in the study. Se75 was added to the tissue culture liver cell Hep-G2 culture, and the radiological standard SeP was used to test the supernatant. The antibody does not dissolve. The antibody is sensitive to SeP. Jurkat cells can be used to measure the amount of SeP, the combination of cell DNA, the number of capacitors, the number of capacitors, the number of dissociation molecules, the number of capacitors on Jurkat cells, the number of capacitors, and the number of solubilizers. Jurkat cells, 2200, 200, 200, 200, 200, 200, 200, 200. After the radiolabelling of the SeP molecule, the structure was added, and the SDS-PAGE spectrum was analyzed. The molecular weight of 100K SeP combined with the molecular weight showed that there was a clear molecular weight.

项目成果

Sakai, Masatoshi: "Enhancement of FcgR- and CR3-mediated neutrophil phagocytosis by cerebrosides."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 278・1. 79-83 (2000)

Sakai，Masatoshi：“脑苷脂对 FcgR 和 CR3 介导的中性粒细胞吞噬作用的增强”。Biochem.Biophys.Res.Commun. 278・1（2000）。

Saito, Yoshiro: "Production and application of monoclonal antibodies to human selenoprotein P"J. Health Sci.. 47・4. 346-651 (2001)

Saito, Yoshiro：“人硒蛋白P单克隆抗体的制备和应用”J. Health Sci. 47・4（2001）。

高橋 和彦: "selenoprotein Pの構造上のユニークな特徴とその機能"生化学. 73・3. 261-264 (2001)

高桥和彦：“硒蛋白P的独特结构特征及其功能”生物化学73・3（2001）。

Saito, Yoshiro: "Selenoprotein P : its structure and function."J.Health Sci.. 46・6. 409-413 (2000)

Saito, Yoshiro：“硒蛋白P：其结构和功能。”J.Health Sci.. 46・6（2000）。

斎藤 芳郎: "血漿セレン含有蛋白質selenoprotein Pのユニークな構造とその機能"放射線生物研究. 36・3. 291-301 (2001)

齐藤义郎：“血浆含硒蛋白硒蛋白P的独特结构和功能”放射生物学研究36・3（2001）。