ES細胞の組織分化誘導による胎生期再生医学

通过诱导ES细胞组织分化的胚胎再生医学

• 批准号: 14657007
• 负责人: 大谷 浩
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Shimane Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657007/
• 关键词: 子宮外発生法; マウス胎児; マウスES細胞; green florescent protein; greesn florescent protein

本年度は、昨年度に引き続き、注入用ES細胞株としてenhanced-green fluorescent protein遺伝子導入ES細胞を用いた。子宮外発生法によりES細胞をマウス胚へ導入し、導入後の細胞の生着とその後の動態について検討した。昨年確立した手技・条件に従い、妊娠13日および16日のJcl:ICRマウス胎児、各腹につき4から6匹に、数十から数百個のES細胞を50-100μm径のガラスミクロピペットを用いて注入した。注入部位としては、昨年検討した前肢芽皮下、脳室、眼に限定して、さらに検討を進めた。導入後、子宮外発生法にて発生を継続させた後、妊娠18日に胎児を得た。細胞を注入した胎児の生存率は、昨年までと同様に高率であった。胎児を実体顕微鏡下にUV灯下で肉眼的に観察し、蛍光を確認できる個体を確認した。しかし、肉眼にて確認が困難な例も多く、さらに実験個体の切片を作成し、抗EGFP抗体を用いて免疫染色することが解析の過程に必要であることが確認された。注入時のマーカーを目印にして免疫染色を施すことにより導入ES細胞の各部での生着が確認された。ES細胞の生着は、注入個体のほぼ全例に認められ、導入手技そのものは再現性をもって使用可能であることが確認された。EGFP陽性細胞の光学顕微鏡下での純形態学的観察では、現在までのところ明確な分化を示す細胞は確認できていない。今後、分化マーカーによる導入ES細胞の分化の詳細な検討と、さらに導入時期の早期化や成長因子などとの同時注入実験などによる分化促進を試みる必要がある。

This year, the ES cell line for injection and the enhanced-green fluorescent protein gene were introduced into ES cells. In utero, ES cells are introduced into the embryo, and after introduction, the cells are generated and the dynamics are investigated. Last year, we established the technical conditions, and on the 13th and 16th day of pregnancy, we injected hundreds of ES cells with diameters of 50-100μm. The injection site is located under the skin of the forelimb, in the eye, and in the eye. After the introduction, the uterus is born, and the fetus is born on the 18th day of pregnancy. The survival rate of the injected fetus is the same as that of the injected fetus. The baby is detected by the naked eye under the microscope and confirmed by the UV lamp. It is difficult to confirm with the naked eye, but it is necessary to prepare individual sections and use anti-EGFP antibodies for immunostaining. When injected, the cells were identified by immunostaining. ES cells are born and injected into the whole case, and the reproducibility of the introduction technique is possible. Pure morphological examination of EGFP-positive cells under optical microscopy showed that the cells were clearly differentiated. In the future, it is necessary to investigate in detail the differentiation of ES cells introduced in the differentiation stage and to inject growth factors into the differentiation stage at the same time.

项目成果

Toshihisa Hatta: "Application of the mouse exo utero development system in the study of developmental biology and teratology."Congenital Anomalies. 44. 2-8 (2004)

Toshihisa Hatta：“小鼠子宫外发育系统在发育生物学和畸形学研究中的应用。”先天性异常。

大谷 浩: "皮膚と附属器の発生"島根医学. 23. 291-301 (2003)

大谷浩：“皮肤和附件的发育”岛根医学 23. 291-301 (2003)。

Noura M.S.Osman: "α1,4-N-Acetylglucosaminyltransferase encoding gene EXTL3 expression pattern in mouse adult and developing tissues with special attention to the pancreas"Anatomy and Embryology. 207. 333-341 (2004)

Noura M.S.Osman：“成年小鼠和发育中组织中的 α1,4-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶编码基因 EXTL3 表达模式，特别关注胰腺”解剖学和胚胎学 207. 333-341 (2004)。

Toshihisa Hatta: "Opposite effects of the maternal immune system activated by interleukin-1b vs.PSK and OK432 on 5-azacytidine-induced birth defects"Congenital Anomalies. 43. 46-56 (2003)

Toshihisa Hatta：“白细胞介素 1b 与 PSK 和 OK432 激活的母体免疫系统对 5-氮杂胞苷诱导的出生缺陷的相反作用”先天性异常。

T.Hatta: "The role of gp 130 in cerebral cortical development: in vivo functional analysis in a mouse exo utero system"J. Neurosci.. 22. 5516-5524 (2002)

T.Hatta：“gp 130 在大脑皮层发育中的作用：小鼠子宫外系统的体内功能分析”J。