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自己肝細胞と3次元胆管ネットワークを用いた再生肝の構築

利用自体肝细胞和3D胆管网络构建再生肝脏

基本信息

批准号：
14657286
负责人：
森正樹
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ヒト肝前駆細胞(oval cell, small hepatocyte)の単離・培養系の確立すでにヒト肝前駆細胞をヒト組織より単離し、培養する手法を試みている。単離には磁気カラムとセルソーターを併用すると共に、細胞種特異的なリガンドを固定化したカラム、培養表面を作製し、単離効率が向上した。新型セルソーターの導入によりSP系細胞の分離・回収能が一段と向上したため、現在ヒト肝前駆細胞の表面マーカーフェノタイプの確立を行っている。これによりマーカー抗体が確定すると、分離技術が更に向上する。2.マウスの肝細胞における、マイクロアレイ遺伝子発現解析本年度は肝幹細胞の遺伝子発現レベルにおける特徴を調べる研究を行った。雄性C57/BL6マウスにHiggins & Andersonの2/3肝切除を施行し、実験的肝切除モデルをマウスで作成し、2、6、24時間と3、7日後にそれぞれ、sham operation群1頭と肝切除群3頭より残肝(再生肝)、膵臓、血液を採取。Agilentのマウス用cDNAマイクロアレイ(8,737遺伝子)を用いて遺伝子発現プロファイルの経時的変化を肝臓、膵臓それぞれで解析した。その結果(1)肝切除術後何れかの時点で4倍以上の発現増強または1/4以下の減弱を認めたのは473遺伝子。(2)肝切除群での経時発現量の変化がsham手術群でのそれと同程度である遺伝子や多峰性を示す遺伝子を除き、肝再生に伴い特異的に変化する162遺伝子を選別した。内訳は2,6,24時間,3,7日目の順に、17,28,37,27,23の計132遺伝子が4倍以上増強、また、4,13,25,6の計30遺伝子が1/4以下に減弱した。(3)肝再生における開始シグナルの候補として、2,6時間後にインターフェロンγ誘導遺伝子、platelet factor 4、procollagen type V、転写因子(NF-1)、増殖因子(FGF)等の増強が見られた。24時間後には、イノスリン受容体、アポトーシス関連遺伝子等の増強、3日後にはG蛋白αs、転写因子(SIN3B)、toll-like receptor-1の増強を認めた。肝再生の終息シグナルの候補として、24時間後には細胞分化因子(tryptophan 2,3-dioxygenase)の増強、3日後にはaxinの増強、癌遺伝子(RAB18)の減弱等が抽出された。3.再生担体としての3次元モデル再生担体としての3次元モデルとして「東洋紡」による中空ファイバーモデルが現時点では最適の実験モデルであると考えられたため、これを用いた再生肝細胞実験を開始している。中空糸の膜厚が50ミクロンと大きいため、液性因子の疎通性がよくないため、改良を試みたが現在のところ不十分である。他社の中空糸モデルを試みているところである。

1. The establishment of culture system of small hepatocyte (oval cell) and the method of culture system of small hepatocyte (oval cell). In addition to the above, the cell species-specific immobilization, culture surface control, and isolation efficiency are also improved. The introduction of new protein into SP cells can lead to the establishment of protein on the surface of liver cells. The antibody is identified and the separation technique is improved. 2. Analysis of the development of liver stem cells and the characteristics of liver stem cells. 2/3 hepatectomy of male C57/BL6 was performed at 2, 6 and 24 hours after operation, 3 and 7 days after operation, 1 head of sham operation group and 3 heads of hepatectomy group were collected. Agilent uses cDNA to analyze the evolution of the genome, including the DNA sequence (8,737 genes). Results: (1) After hepatectomy, the time point of occurrence was increased by more than 4 times, the time point of occurrence was decreased by less than 1/4, and the time point of occurrence was decreased by 473 times. (2)The variation of the time-to-occurrence of hepatectomy and sham surgery is similar in degree to that of liver regeneration, and the variation of 162 genes is associated with the variation of liver regeneration. In the inner layer, 2, 6, 24 times, 3, 7 days, 17, 28, 3,7, 27, 23 and 132 genes increased by more than 4 times, 4, 13, 25, 6 and 30 genes decreased by less than 1/4. (3)After 2 or 6 hours, the induction of γ-inducible gene, platelet factor 4, collagen type V, NF-1 and FGF increased. After 24 hours, the expression of protein receptor, protein receptor and toll-like receptor increased, and after 3 days, the expression of protein αs, protein factor (SIN3B) and toll-like receptor-1 increased. After 24 hours, the expression of tryptophan 2,3-dioxygenase increased, the expression of axin increased, and the expression of RAB18 decreased. 3. Regenerative support and 3-dimensional regeneration support and 3-dimensional regeneration support and The thickness of the hollow film is 50%, the permeability of the liquid factor is 50%, and the improvement of the film thickness is 50%. He's trying to make a difference.