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精巣の分化成熟を支配する精原細胞因子の解明

阐明控制睾丸分化和成熟的精原细胞因素

基本信息

批准号：
14657412
负责人：
原孝彦
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657412/
关键词：
精原細胞セルトリ細胞精巣転写制御 24p3 c-KIt 遺伝子発現 c-Kit

项目摘要

我々は精原細胞以降の精子分化が停止しているJSD変異マウス精巣と精原細胞がほとんどないW/Wv変異マウス精巣との遺伝子発現を比較する研究を通じて、24p3やSui1など24種類の遺伝子が精原細胞依存的にセルトリ細胞で発現することを報告した。昨年、新生マウス精巣由来のセルトリ細胞株を新たに樹立し、精原細胞との共培養による24p3 mRNAの転写誘導をin vitroで再現することに成功した。今年度は、このアッセイ系を用いて転写活性化領域を徐々に短縮していき、精原細胞による24p3遺伝子の転写活性化に必要な責任領域を同定した。ここにはNFκBのコンセンサス配列が存在し、ゲルシフト解析とクロマチン免疫沈降法によりNFκBのp50,p65が24p3遺伝子プロモーター領域に特異的に結合することを見出した。さらにドミナントネガティブIκBαの強制発現により、精原細胞による24p3遺伝子の転写誘導は抑制された。24p3遺伝子の転写誘導活性は精原細胞の培養上清に存在し、IL-1やLPS刺激時よりも活性化の程度が高かった。以上の結果から、セルトリ細胞では精原細胞から分泌される物質によりNFκB経路が活性化され、24p3遺伝子の転写活性化が引き起こされていることが示唆された。最近、24p3遺伝子産物が精子の運動性あるいは細菌感染防御に働く可能性が報告されている。したがって、精原細胞は精巣のホメオスタシスを維持するために、炎症性反応と共通のシグナル伝達経路を利用しているものと推察される。本研究を通じて我々は、精原細胞側のファクターが精巣の機能成熟に関与することをはじめて示し、精原細胞からセルトリ細胞への逆シグナルの実在を証明した。本知見は、ヒトの生殖器官発達の分子設計図の理解にも大きく貢献するものと期待される。

We report on the comparative study of spermatogonia differentiation and spermatogonia differentiation in vitro, 24 p3, 1, 24 species of spermatogonia and spermatogonia. In 2005, we successfully established a new cell line derived from the spermatogonia and co-cultured it with 24p3 mRNA. This year, we will use the same method to determine the necessary areas of responsibility for the activation of spermatogonia in 24 p3 genes. The expression of NF κ B protein in p50, p65 and p24 was analyzed by immunoprecipitation method, and the domain-specific binding of NF κ B protein in p50, p65 and p24 was observed. The stress induction of I κ B α in spermatogonia and the inhibition of gene expression in spermatogonia were investigated. The activity of 24p3 gene was higher in the culture supernatant of spermatogonia than that in the culture supernatant of spermatogonia stimulated by IL-1 and LPS. The above results showed that the NF κ B pathway was activated in spermatogonia, and the 24p3 gene was activated in spermatogonia. Recently, 24 p3 gene products have been reported as having the potential to protect against pathogenic bacteria. In addition, spermatogonia may maintain the normal state of sperm, and may be used to investigate the inflammatory response. This study demonstrates the relationship between spermatogonia and functional maturity of spermatogonia through the study of spermatogonia and spermatogonia. The present invention provides an insight into the molecular design of reproductive organ development and its potential contribution.