再生医療における象牙質タンパク(DMP-I)の有用性に関する基礎的研究

牙本质蛋白（DMP-I）在再生医学中的用途的基础研究

• 批准号: 14657491
• 负责人: 恵比須 繁之
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657491/
• 关键词: DMP-1; 象牙質; 象牙芽細胞; 窩洞形成; 修復象牙質; 免疫染色; 再生医療; 象牙橋; 水酸化カルシウム; 直接覆髄

昨年度に作製した抗Dentin Matrix Protein-1抗体(以下、抗DMP-1抗体)を用いて、窩洞形成後のラットの臼歯におけるDMP-1の発現の有無とその局在について免疫組織化学的に検索した。9週齢雄性ウィスター系ラットの上顎第一臼歯近心面に、全身麻酔下でラウンドバーを用いて深さ約0.4mmの窩洞を形成し、グラスアイオノマーセメントにて仮封を行った。窩洞形成後0、1、2、3、5、7、14および28日目に同ラットを全身麻酔下にて脱血、潅流固定(6%パラホルムアルデヒド)し、被験歯である上顎第一臼歯を歯槽骨とともに摘出した。採取した被験歯を10時間浸漬固定した後、10日間脱灰(10%EDTA)を行い、通法にしたがってパラフィン包埋し、ミクロトームにて厚さ5μmの連続切片を作製した。これらの切片に対してヘマトキシリン・エオジン染色を施し、光学顕微鏡下にて病理組織学的に評価したところ、窩洞形成後14日目以降の試料において窩洞直下の歯髄腔内に修復象牙質の形成が認められた。さらに他の切片に対して、昨年度に作製した抗DMP-1抗体を用いた免疫染色を行ったところ、窩洞形成後3日目の試料の窩洞直下の象牙細管に沿ってDMP-1の発現が強く認められた。DMP-1の発現は窩洞形成後28日目まで継続して認められた。これらのことから、窩洞形成という刺激に対して象牙芽細胞が反応し、DMP-1の発現が認められることが明らかとなった。また、DMP-1の発現を認めた時期以降に修復象牙質の形成が認められたことより、DMP-1が修復象牙質の形成に重要な役割を果たしている可能性が示唆され、象牙質再生医療への展望が開けたと考えられる。

Anti-Dentin Matrix Protein-1 antibody (hereinafter anti-DMP-1 antibody) was prepared last year to detect the presence or absence of DMP-1 after cavity formation. 9-week old male teeth are located near the center of the first maxillary tooth, and the whole body is numb. The cavity with a depth of about 0.4 mm is formed, and the cavity is sealed. On days 0, 1, 2, 3, 5, 7, 14, and 28 after the cavity was formed, the first maxillary tooth was removed under general anesthesia, and the flow was fixed (6%). After 10 days of immersion fixation, 10 days of deashing (10%EDTA), the preparation of continuous sections with a thickness of 5μm was carried out. 14 days after the formation of the cavity, the formation of the dentin in the cavity was confirmed. The anti-DMP-1 antibody was prepared yesterday and immunostained. The detection of DMP-1 in the ivory tubule under the cavity was strongly recognized 3 days after cavity formation. The discovery of DMP-1 was confirmed 28 days after the cavity was formed. The expression of DMP-1 in ivory bud cells was detected by the stimulation of cavity formation. The development of DMP-1 in dentin regeneration therapy is expected to have a significant impact on dentin regeneration.

项目成果

Takahashi Y.et al.: "Immunohistochemical expression of DMP1 during reparative dentinogenesis following cavity preparation"Journal of Dental Research. 83・Special Issue(In press). (2004)

Takahashi Y.等人：“空洞制备后修复性牙本质发生过程中DMP1的免疫组织化学表达”《牙科研究杂志》83·特刊（2004年）。

Toyosawa M.et al.: "Expression of dentin matrix protein 1 in tumors causing oncogenic osteomalacia"Modern Pathology. 17(In press). (2004)

Toyosawa M.et al.：“牙本质基质蛋白 1 在导致致癌性骨软化症的肿瘤中的表达”现代病理学。

Toyosawa M.et al.: "mRNA expression and protein localization of dentin matrix protein 1 during dental root formation"Bone. 34・1. 124-133 (2004)

Toyosawa M.等：“牙根形成过程中牙本质基质蛋白1的mRNA表达和蛋白质定位”Bone.124-133。