ヌクレオチド除去修復のバックアップ機構に関する研究

核苷酸切除修复备份机制的研究

• 批准号: 14658159
• 负责人: 松永 司
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658159/
• 关键词: DNA損傷; 紫外線; モノクローナル抗体; シクロブタン型ピリミジンダイマー; (6-4)光産物; 色素性乾皮症; コケイン症候群; ヌクレオチド除去修復

我々は、紫外線誘発DNA損傷であるシクロブタン型ピリミジン二量体や(6-4)光産物を特異的に認識するモノクローナル抗体を作製し、1J/m^2という正常ヒト細胞の生存率に影響を与えない紫外線線量域におけるDNA損傷修復能を測定できる超高感度定量系を開発した。その結果、従来の線量域(10-40J/m^2)では全く修復能が見られなかった色素性乾皮症A群(XP-A)患者由来細胞XP12BE、およびXP-G患者由来細胞XP2BIにおいて、(6-4)光産物が24時間で約40-50%修復されるという現象を見出した。本研究では、この現象がヌクレオチド除去修復が完全に破壊されたときのバックアップシステムによるものか否かさらに検証した。そこで、臨床症状と修復欠損がより重篤なXPEMB-1(XP-A)細胞、およびXPCS2LV(コケイン症候群併発型XP-G)細胞について1J/m^2照射後の(6-4)光産物の修復動態を解析したところ、これらの細胞ではウェスタンブロッティングで各欠損タンパク質が全く検出できなかったが、やはり24時問で20-40%程度の修復が観察された。また、検出限界以下の変異型タンパク質の存在とそれによる残存活性を否定するため、XPAあるいはXPGのノックアウトマウス由来細胞の供与を受けて同様の解析を行った結果、色素性乾皮症患者由来細胞で見られるよりも程度は低いものの(6-4)光産物の修復傾向が確認された。以上の結果より、1J/m^2照射時に見られるヌクレオチド除去修復欠損細胞における(6-4)光産物の修復能は、ヌクレオチド除去修復以外のバックアップシステムによる可能性が示唆された。

I 々 は, uv induced DNA damage 発 で あ る シ ク ロ ブ タ ン type ピ リ ミ ジ ン 2 quantity body や を (6-4) light product specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル し the antibody を cropping, 1 j/m ^ 2 と い う normal ヒ の ト cell survival に influence を and え な い ultraviolet radiation dose domain に お け る determination of DNA damage repair can を で き る ultra high sensitivity The quantity system を develops た. そ の results, 従 の dose domain (10 to 40 j/m ^ 2) で は く repair all can see が ら れ な か っ た pigmentary dry skin disease group A (XP - A) patients' origin cells XP12BE, お よ び origin cells in patients with XP - G XP2BI に お い て, (6-4) light product が 24 time で about 40-50% repair さ れ る と い を う phenomenon See exit た. This study で は, こ の phenomenon が ヌ ク レ オ チ ド remove repair が に completely broken 壊 さ れ た と き の バ ッ ク ア ッ プ シ ス テ ム に よ る も の か no か さ ら に 検 card し た. そ こ で, clinical symptoms と repair owe damage が よ り heavy Benedict な XPEMB - 1 (XP - A) cells, お よ び XPCS2LV (コ ケ イ ン syndrome type and 発 XP - G) cells に つ い て 1 j/m ^ 2 after irradiation の (6-4) light products の repair dynamic を し た と こ ろ, こ れ ら の cells で は ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ で Each owe loss タ ン パ ク qualitative が full く 検 out で き な か っ た が, や は り 24 で asked 20-40% level の repair が 観 examine さ れ た. ま た, 検 limit the following の - alien タ ン パ ク qualitative の is と そ れ に よ る remaining active を negative す る た め, XPA あ る い は XPG の ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス origin cells の を and supply by け て with others in line analytical を の っ た results, dry pigment skin disease patients see origin cells で ら れ る よ り も degree low は い も の の の (6-4) light products Compound tendency が confirms された. の above results よ り j/m ^ 2, 1 light に see ら れ る ヌ ク レ オ チ ド remove repair owe damaged cells に お け る の (6-4) light product can repair は, ヌ ク レ オ チ ド apart from repair の バ ッ ク ア ッ プ シ ス テ ム に よ が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Wakasugi, M.: "DDB accumulates at DNA damage sites immediately after UV irradiation and directly stimulates nucleotide excision repair"J.Biol.Chem.. 277(3). 1637-1640 (2002)

Wakasugi, M.：“DDB 在紫外线照射后立即在 DNA 损伤位点积聚，并直接刺激核苷酸切除修复”J.Biol.Chem.. 277(3)。

Spivak, G.: "Ultraviolet-sensitive syndrome cells are defective in transcription-coupled repair of cyclobutane pyrimidine dimers"DNA Repair. 1(8). 629-643 (2002)

Spivak, G.：“紫外线敏感综合征细胞在环丁烷嘧啶二聚体的转录偶联修复中存在缺陷”DNA 修复。