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除去修復エンドヌクレアーゼの機能とその欠損による分子病態に関する研究

切除修复核酸内切酶的功能及其缺陷引起的分子病理学研究

基本信息

批准号：
10165206
负责人：
松永司
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヌクレオチド除去修復(NER)において、XPGとXPF-ERCC1はそれぞれ損傷の3′側と5′側の切断酵素として働くが、XPGやERCC1をノックアウトしたマウスはいづれも成長阻害、離乳前死亡というNER欠損だけでは説明できない重篤な症状を示す。また、XPGはXPF-ERCC1による5′側切断にも関与している可能性が示唆されており、本研究ではXPGの除去修復エンドヌクレアーゼとしての機能以外の役割に注目した。1. Two-hybridシステムを用いた解析より、XPGとERCC1の相互作用が示唆された。プルダウンアッセイを用いて試験管内で確認したところ、バキュロウィルス高発現系から精製されたリコンビナントタンパクや試験管内転写/翻訳反応により合成されたタンパクで両者の相互作用が確認できた。また、その相互作用ドメインのマッピングを行い、XPGはN末とC末の2箇所(主にN末)にERCC1はN末の領域に特定できた。本研究で示されたXPGとERCC1との相互作用は、XPF-ERCC1の損傷部位へのリクルートに関与しているのかもしれない。2. XPGタンパクはNERとは別の修復機構である塩基除去修復(BER)にも関与する可能性が示唆されており、この点について検討した。まず、ウラシルを1個のみ含むDNA基質を用いて塩基除去修復の試験管内切断反応系を確立した。これを用いて各種細胞粗抽出液の切断活性を比較したところ、XP-G患者由来細胞や放医研の塩見らによって樹立されたxpgノックアウトマウス由来細胞の抽出液は、正常細胞に比べて常に低い切断活性(50-80%)を示すことがわかった。また、この低切断活性はウラシルDNAグリコシラーゼの反応効率の低下に起因していた。しかし、リコンビナントXPGを反応系に添加しても相補されず、XPGの塩基除去修復への関与は間接的なものであることが示唆された。

XPG and XPF-ERCC1 are used to remove the enzyme from the 3′ side and 5′ side of the lesion. In addition, XPG has the potential to cut off the 5′ side of XPF-ERCC1. In this study, we focused on the repair of XPG except for its function. 1. The interaction between XPG and ERCC1 is demonstrated by the analysis of the Two-hybrid system. The interaction between the test tube and the test tube is confirmed by the reaction between the test tube and the test tube. The interaction between the two sides of the line, XPG, N end, C end, ERCC, 1 end, N end, field, specific, This study shows that the interaction between XPG and ERCC1 is closely related to the damage site of XPF-ERCC1. 2. XPG is not a repair mechanism, but a base removal repair (BER) mechanism. A novel DNA matrix was developed for the detection of DNA damage in vitro. The cleavage activity of various cell extracts was compared with that of normal cells (50-80%). The reason for this low cleavage activity is that the DNA cleavage rate is low. XPG is a new type of anti-virus system, which is composed of two parts: one part is added to XPG, the other part is removed from XPG, the other part is added to XPG.