ヌクレオチド除去修復反応の細胞内調節機構に関する研究

核苷酸切除修复反应的细胞内调控机制研究

• 批准号: 12143202
• 负责人: 松永 司
• 金额: $ 20.22万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12143202/
• 关键词: DNA損傷; ヌクレオチド除去修復; DDB; シクロブタン型ピリミジンダイマー; 紫外線; ユビキチン・プロテアソーム系; アポトーシス; c-Jun; 試験管内修復反応; XPA; H2AX; (6-4)光産物; 局所紫外線照射; ゲルシフトアッセイ

我々はこれまでDDB (DDB1/DDB2ヘテロダイマー)がヌクレオチド除去修復の促進因子として働くことを示してきたが、最近このDDBがユビキチン・プロテアソーム系にも関与することが示されており、本研究でもヌクレオチド修復の調節や修復以外におけるDDBの機能に視野を広げて解析を行った。具体的には、作製したDDB1特異的モノクローナル抗体を用いてDDB1の細胞内局在性を調べるとともに、DDB1とDDB2を各々ドキシサイクリン存在下で過剰発現する細胞株を樹立し、各サブユニットを過剰発現させたときの細胞への影響を検討した。その結果、抗DDB1モノクローナル抗体による免疫染色像は、主に細胞質に局在するという従来の過剰発現細胞を用いた報告とは異なり、核内でドット状の局在を示した。また、この染色像はDDB2遺伝子に変異をもつXP-E細胞、およびDDB2の発現が抑制されているチャイニーズハムスター細胞でも観察されることからDDB2に非依存的であることがわかり、他の因子の関与が考えられた。また、核の一部に局所紫外線照射を行うとこのドットはDNA損傷部位に集積し、この反応はDDB2に依存していた。一方、DDB1を過剰発現させた細胞ではドット状の染色像は見られず、多くは細胞質のみが強く均質に染色された。興味深いことに、このDDB1過剰発現細胞株は増殖能やコロニー形成能に著しい抑制が見られ、一部の細胞ではアポトーシス誘導が観察された。さらに、ヌクレオチド除去修復能には顕著な影響は認められなかったが、過剰発現時に細胞内のc-Jun量が顕著に増加し、またリン酸化体も増加していることがわかった。以上の結果より、DDB1がc-Junの活性調節およびアポトーシスにも関与する可能性が示唆された。

I 々 々 れまで れまでDDB (DDB1 / DDB2 ヘ テ ロ ダ イ マ ー) が ヌ ク レ オ チ ド remove repair の promoting factor と し て 働 く こ と を shown し て き た が, recently こ の DDB が ユ ビ キ チ ン · プ ロ テ ア ソ ー ム department に も masato and す る こ と が shown さ れ て お り, this study で も ヌ ク レ オ チ ド repair の adjust や repair outside に お け る DDB に の function Wild を broad げて parses を line った. Specific に は, cropping し た DDB1 specific モ ノ ク ロ ー ナ を ル antibody with い て DDB1 の bureau in the cell in the sexual を adjustable べ る と と も に, DDB1 と DDB2 を each 々 ド キ シ サ イ ク リ ン で in the presence of a turning 発 now す る cell lines を し, each サ ブ ユ ニ ッ ト を through turning 発 now さ せ た と き の cells へ の influence を beg し 検 た. そ の results, DDB1 モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody に よ る immune dyeing like は, に cytoplasm に innings in す る と い う 従 to の turning 発 now cells を using い た report と は different な り, nuclear で ド ッ ト shape の bureau in を shown し た. ま た, こ の dyeing like は DDB2 posthumous son 伝 に - different を も つ XP -e cells, お よ び DDB2 の 発 now が inhibit さ れ て い る チ ャ イ ニ ー ズ ハ ム ス タ ー cells で も 観 examine さ れ る こ と か ら DDB2 に of interdependent で あ る こ と が わ か り, he の factor の masato and が exam え ら れ た. ま た bureau ultraviolet radiation, nuclear の a に を line う と こ の ド ッ ト は DNA injury に し deposition, こ の anti 応 は DDB2 に dependent し て い た. Side, DDB1 を before turning 発 now さ せ た cells で は ド ッ ト shape の dyeing like は see ら れ ず, multiple く は cytoplasm の み が strong く homogeneous に dyeing さ れ た. Takes deep い こ と に, こ の DDB1 through turning 発 now cell lines は rights can yield や コ ロ ニ ー formation can に し い inhibit が see ら れ, a の cell で は ア ポ ト ー シ ス induced が 観 examine さ れ た. さ ら に, ヌ ク レ オ チ ド can remove repair に は 顕 な affect the は recognize め ら れ な か っ た が, turning 発 now の に cell c - Jun quantity が 顕 に raised plus し, ま た リ ン acidification も raised body plus し て い る こ と が わ か っ た. The above <s:1> results よ よ, the regulation of DDB1がc-Jun <s:1> activity およびアポト シスに シスに が relationship and する possibility が suggest された.

项目成果

Fu, D.: "cDNA cloning of the chicken DDB1 gene encoding the p127 subunit of damaged DNA-binding protein"Gene Genet. Syst.. (in press). (2003)

Fu, D.：“编码受损 DNA 结合蛋白 p127 亚基的鸡 DDB1 基因的 cDNA 克隆”Gene Genet。

Mone, M.J.: "Local UV-induced DNA damage in cell nuclei results in local transcription inhibition"EMBO. Rep.. 2(11). 1013-1017 (2001)

Mone, M.J.：“细胞核中局部紫外线诱导的 DNA 损伤导致局部转录抑制”EMBO。

Lan, L.: "Functional and physical interactions between ERCC1 and MSH2 for resistance to cis-platinum in mammalian cells"DNA Repair. 3(2). 135-143 (2004)

Lan, L.：“ERCC1 和 MSH2 之间的功能和物理相互作用对哺乳动物细胞中顺铂的抵抗力”DNA 修复。

Wakasugi, M.: "DDB accumulates at DNA damage sites immediately after UV irradiation and directly stimulates nucleotideexcision repair"J. Biol. Chemn.. 277(3). 1637-1640 (2002)

Wakasugi, M.：“DDB 在紫外线照射后立即在 DNA 损伤部位积聚，并直接刺激核苷酸切除修复”J.

Ohtoshi,E.: "Respective roles of cyclobutane pyrimidine dimers, (6-4) photoproducts and minor photoproducts in UV mutagenesis of repair deficient xeroderma pigmentosum A cells."Cancer Res.. 60(6). 1729-1735 (2000)

Ohtoshi,E.：“环丁烷嘧啶二聚体、(6-4) 光产物和次要光产物在修复缺陷性着色性干皮病 A 细胞的紫外线诱变中的各自作用。”Cancer Res.. 60(6)。