新しい電子顕微鏡タグの開発と生体内分子の絶対数計測

新型电子显微镜标签的开发及生物分子绝对数的测量

• 批准号: 15651062
• 负责人: 重本 隆一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences (2004)Okazaki National Research Institutes (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15651062/
• 关键词: 金クラスター; 分子数計測; 受容体; イオンチャネル; タグ; 遺伝子改変動物; 電子顕微鏡; ナノ粒子; メタルチオネイン; 分子数; 融合蛋白質

生体分子の絶対数の定量を目的として、メタルチオネインを融合させた蛋白質を細胞に発現させメタルゴールドをその場で形成させる実験を行った。しかし、生体に存在するメタルチオネインに金イオンを結合させたあと還元しても、メタルチオネインのノックアウト動物と金標識の有意な差を見出す事はできず、in situの金クラスターの形成はメタルチオネイン以外の理由による核形成に伴って起こっている事が明らかとなった。そこでまずは、別のペプチド性タグを標的分子に導入し、これに予め金粒子で標識したリガンドを結合させる戦略に転換した。現在myc, HA, streptag, BTX binding site, GFPについてタグ導入蛋白質をin vivoで発現させるためのウィルスの作製を進めており、GFPについては遺伝子導入動物の作成も進んでいる。しかし研究期間内には最終的な目標である、分子絶対数の計測には至っておらず、今後とも努力を続けていきたいと考えている。

For quantitative analysis of biological molecules, the expression of proteins in cells and the formation of proteins in cells are studied. In addition to the reasons for the formation of the gold in situ, the nuclear formation is accompanied by the formation of the gold in situ and the formation of the gold in situ. This is the first time that a molecule has been introduced into the body of a human being, and the second time that a molecule has been introduced into the body of a human being. myc, HA, streptag, BTX binding site, GFP, GFP. During the research period, the ultimate goal will be met, the absolute number of molecules will be measured, and future efforts will be made.

项目成果

Immunocytochemical localization of the α1A subunit of the P/Q-type calcium channel in the rat cerebellum

• DOI: 10.1111/j.0953-816x.2004.03319.x
• 发表时间: 2004-04-01
• 期刊: EUROPEAN JOURNAL OF NEUROSCIENCE
• 影响因子: 3.4
• 作者: Kulik, A;Nakadate, K;Shigemoto, R
• 通讯作者: Shigemoto, R