酸化ストレス解析のための特異的モノクローナル抗体作製法の開発

开发用于氧化应激分析的特异性单克隆抗体生产方法

• 批准号: 15651100
• 负责人: 坂口 和靖
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15651100/
• 关键词: 抗体; 酸化ストレス; メチオニンスルホキシド; ペプチド; ビオチン-アビジン; 活性酸素; 翻訳後修飾

タンパク質の機能制御・安定性変化に関わる修飾の検出・解析には修飾部位を特異的に認識する抗体の使用が必須である。しかしながら、酸化によるタンパク質の修飾部位のみを特異的に認識する抗体は実用化されていないのが現状であり、酸化ストレスによる修飾を特異的に認識する抗体の開発が切望されている。本研究の目的は、「タンパク質の酸化ストレスによるタンパク質修飾を特異的に認識するモノクローナル抗体を開発する」ことである。前年度において試みたメチオニンスルホキシドのみを認識する抗体の作製は困難であったため、周辺のペプチド配列を含めたメチオニンスルホキシドペプチド特異的抗体の作製を試行することとした。標的のペプチドとして、癌抑制タンパク質p53の四量体形成ドメインを選択した。このドメインには1個のメチオニン残基が存在し、この残基の酸化により四量体形成の不安定化を引き起こすことが知られている。抗原用メチオニンスルホキシド含有p53ペプチドをデザインして化学合成し、マレイミド化したキャリアタンパク質KLHと結合させ、これをBALB/cマウスに免疫した。その結果、血清レベルで非酸化ペプチドよりもメチオニンスルホキシド含有ペプチドにわずかではあるが特異性が見いだされた。現在、これを用いたメチオニンスルホキシドペプチド特異的モノクローナル抗体の作製を進めている。さらに、より簡便な蛍光性ビオチン化ペプチドの合成のためにon-resin法を検討した。その結果Fmoc-Dap(Dde)-OHを用いる方法を見出した。この方法によりペプチド合成中の樹脂を使用し、効率良く蛍光性ビオチン化ペプチドの調製が可能となった。

タ ン パ ク qualitative の royal, functional system stability - the に masato わ る modified の 検 out, parsing に は modified parts を specific に know す る antibody の use が must で あ る. し か し な が ら, acidification に よ る タ ン パ ク qualitative の modified parts の み を specific に know す る antibody は be in turn さ れ て い な い の が status quo で あ り, acidification ス ト レ ス に よ る modified を specific に know す る antibody の open 発 が eager さ れ て い る. は の purpose, this study "タ ン パ ク qualitative の acidification ス ト レ ス に よ る タ ン パ ク qualitative modified を specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を open 発 す る" こ と で あ る. Before the annual に お い て try み た メ チ オ ニ ン ス ル ホ キ シ ド の み を know す る antibody の cropping は difficult で あ っ た た め, zhou 辺 の ペ プ チ ド match column を containing め た メ チ オ ニ ン ス ル ホ キ シ ド ペ プ チ ド を try out the specific antibody の cropping す る こ と と し た. Target: ペプチドと ペプチドと て て, cancer inhibition: タ パ パ, formation of tetrasomes of <s:1> p53 <s:1>, ドメ を を を を select 択 た た. こ の ド メ イ ン に は 1 の メ チ オ ニ ン residues が し, こ の residues の acidification に よ り four quantity body formation の unrest turn を lead き こ す こ と が know ら れ て い る. Antigen with メ チ オ ニ ン ス ル ホ キ シ ド contains p53 ペ プ チ ド を デ ザ イ ン し て chemical synthetic し, マ レ イ ミ ド change し た キ ャ リ ア タ ン パ ク qualitative KLH と combining さ せ, こ れ を BALB/c マ ウ ス に immune し た. そ の results, serum レ ベ ル で the acidification ペ プ チ ド よ り も メ チ オ ニ ン ス ル ホ キ シ ド contains ペ プ チ ド に わ ず か で は あ る が specificity が see い だ さ れ た. Now, こ れ を with い た メ チ オ ニ ン ス ル ホ キ シ ド ペ プ チ ド specific モ ノ ク ロ ー ナ ル を into the antibody の cropping め て い る. Simple さ ら に, よ り な 蛍 optical ビ オ チ ン change ペ プ チ ド の synthetic の た め に on resin method を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ result Fmoc-Dap(Dde)-OHを using the を る method を results in た. こ の way に よ り ペ プ チ ド を の resin used in synthetic し, good working rate く 蛍 optical ビ オ チ ン change ペ プ チ ド の modulation が may と な っ た.

项目成果

Hetero-oligomer formation of peptides derived from tetramerization domain in tumor suppressor protein p53.

源自肿瘤抑制蛋白 p53 中四聚化结构域的肽的异源寡聚体形成。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Peptide Science 2003
• 作者: Sakaguchi;K.
• 通讯作者: K.

Sakaguchi, K.: "Hetero-Oligomer Formation of Peptides Derived from Tetramerization Domain in Tumor Suppressor Protein p53"Peptide Science. (in press). (2004)

Sakaguchi, K.：“肿瘤抑制蛋白 p53 中四聚化结构域衍生的肽的异源寡聚体形成”肽科学。

Specific Affinity Labeling of Cys60 in the δ Opioid Receptor by Npys-containing Dynorphin A Anolog

含 Npys 的强啡肽 A 类似物对 δ 阿片受体中的 Cys60 进行特异性亲和力标记

• 发表时间: 2004
• 期刊: Peptide Science 2003
• 作者: Honda;K.
• 通讯作者: K.

Honda K.: "Specific Affinity Labeling of Cys60 in the δ Opioid Receptor by Npys-containing Dynorphin A Anolog"Peptide Science. in press. (2004)

Honda K.：“含有 Npys 的强啡肽 A 类似物对 δ 阿片受体中的 Cys60 进行特异性亲和力标记”，出版中的肽科学。

Sakaguchi, K.: "Phosphorylation Site-Specific Monoclonal Antibody Recognizing Ser(P)-Gin Sequence"Peptide Science. 2002. 439-442 (2003)

Sakaguchi, K.：“磷酸化位点特异性单克隆抗体识别 Ser(P)-Gin 序列”肽科学。