p53誘導性ホスファターゼWip1の局在化調節を介した細胞周期の制御機構の解明

阐明p53诱导磷酸酶Wip1定位调节介导的细胞周期控制机制

• 批准号: 12213105
• 负责人: 坂口 和靖
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213105/
• 关键词: ホスファターゼ; 脱リン酸化; リン酸化; 細胞周期

本研究では、Wip1ホスファターゼの基質特異性について、リン酸化によりその機能が調節されているp53配列由来のリン酸化ペプチドを用いin vitroにおいて解析した。まず、p53のin vivoでのリン酸化状態を理解するために、検討されていなかったSer6、Ser9について解析し、DNA損傷性のストレスによりこれらの部位のリン酸化が著しく亢進することを示した。また、Ser9のリン酸化はSer6のリン酸化に依存してCK1によりリン酸化されることを見い出した。Wip1は、GSTまたはHis-tagをN末端に付加した融合タンパク質として発現さた。計12種のp53リン酸化ペプチドを化学合成し、これらを基質としてWip1の脱リン酸化活性を評価した。その結果、Wip1は15、20、33、37位のSer残基あるいは18位Thr残基がリン酸化されたp53N端の酸性リン酸化ペプチドを脱リン酸化したが、C端の塩基性領域にある315、371、376、378および392位Ser残基のリン酸化部位に対してほとんど脱リン酸化活性を示さなかった。これは、Wip1調節ドメインは塩基性に富んでいるため、Wip1自体が酸性ペプチドとの親和性が高いことに起因するためではないかと考えられた。そこで、さらに、Wip1の親和性に対するp53N端配列の影響を検討するため、鎖長の異なる3種の15位リン酸化ペプチドについて検討した。p53(1-39)中の15位の脱リン酸化活性と比較し、p53(1-24)に対する脱リン酸化は低活性であったがp53(10-39)に対してはより高活性であった。以上の結果より、p53により誘導されるWip1は酸性領域に存在するリン酸化部位に対し親和性を持ち、p53の安定化・活性化に重要であるN末端部をフィードバック調節により脱リン酸化し、p53を不活性化する可能性が示された。

In this study, we analyzed the function of p53 in vitro and the origin of p53 in vitro. The p53 in vivo acidification status is understood, discussed, and analyzed for Ser6 and Ser9, and DNA damage is demonstrated. Ser9 and Ser6 are the two most important components of the protein chain. Wip1, GST, His-tag, N-terminal, fusion, and discovery. A total of 12 species of p53 were synthesized and evaluated for their catalytic activity. As a result, Ser residues at positions 15, 20, 33, and 37 of Wip1 were deacidified at position 18, and Ser residues at positions 315, 371, 376, and 392 were deacidified at position 18. Wip1 regulation is the cause of high acidity. The effect of N-terminal alignment on the affinity of p53 was investigated in three different 15-position amino acids. p53(1-39) has a relatively low activity for decarboxylation, p53(1-24) has a relatively high activity for decarboxylation, and p53(10-39) has a relatively low activity for decarboxylation. The above results indicate that p53 is induced in Wip 1, and the presence of acidic sites in Wip1, the stability and activation of p53 are important, and the N-terminal sites in Wip 1 are regulated by p53, and the inactivation of p53 is possible.

项目成果

Higashimoto,Y., et al.: "Human p53 is phosphorylated on Serine 6 and 9 in response to DNA Damage-Inducing Agents."J.Biol.Chem.. 275. 23199-23203 (2000)

Higashimoto,Y., et al.：“响应 DNA 损伤诱导剂，人类 p53 在丝氨酸 6 和 9 上被磷酸化。”J.Biol.Chem.. 275. 23199-23203 (2000)