p53誘導性ホスファターゼWip1の局在化とSH3蛋白質を介した細胞周期の制御

p53 诱导的磷酸酶 Wip1 的定位和通过 SH3 蛋白控制细胞周期

• 批准号: 13214079
• 负责人: 坂口 和靖
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214079/
• 关键词: ホスファターゼ; 脱リン酸化; リン酸化; 細胞周期

タンパク質のリン酸化・脱リン酸化は、様々な生命現象のあらゆる局面でのタンパク質の機能の主たる制御機構であり、リン酸化を触媒するキナーゼと脱リン酸化を触媒するホスファターゼにより協同的、可逆的に調節を受けている。Wip1(Wild-type p53 induced phosphatase 1)は、p53依存的に誘導される遺伝子として発見された。その遺伝子産物Wip1は605アミノ酸よりなり、N末端領域にPP2CタイプのSer/Thrホスファターゼドメインを有する。本研究は、p53誘導性ホスファターゼWip1を標的とした脱リン酸化による細胞周期制御の新規な機構を解明することを目的とし、まずWip1の局在化およびWip1と相互作用するタンパク質の解析において必須なツールとなるWip1のモノクローナル抗体の作製を実施した。次に、Wip1の酵素機能解析のために、非放射性で高感度なホスファターゼ活性測定法を新規に開発し、この方法を用いてWip1のホスファターゼ活性を検討した。p53のATMおよびATRによるリン酸化部位である15位セリンがリン酸化されたペプチドを基質としたin vitroでのホスファターゼ活性測定の結果、GST-Wip1がこのリン酸化ペプチドに対し高い脱リン酸化活性をもつことが示された。また、基質としたこのペプチドについて、Wip1との相互作用の理解のために、その構造におけるリン酸化の影響を検討した。その結果、このペプチドの構造はリン酸化によって影響を受け、よりopenなコンフォメーションに変化することが明かとなった。この結果は、p53の15位セリンのリン酸化によりこの領域の構造が変化しWip1との相互作用が容易になることを示唆している。

The main control mechanism of the quality of the biological phenomenon is the synergistic and reversible regulation of the biological phenomenon. Wip1(Wild-type p53 induced phosphatase 1) is a novel gene that can be induced by p53. The product Wip1 has 605 amino acids, and the N-terminal domain has PP2C amino acids. This study aims to clarify the new mechanisms of cell cycle regulation for p53-inducible Wip1 targets, and to implement the mechanism of Wip1 antibodies for the analysis of Wip1 interactions. Secondly, in the analysis of the enzyme function of Wip1, a new non-radioactive and high-sensitivity method for measuring the activity of Wip1 was developed, and this method was used to evaluate the activity of Wip1. p53 ATR and p53 ATR are the 15-bit sites of p53 and p53 ATR and p53 are the 15-bit sites of p53 ATR and p53 ATR. To discuss the influence of acidification on the understanding of the interaction between the matrix and the structure. As a result, the structure of this project is affected by acidification, and the structure of this project is affected by acidification. As a result, the structure of p53 and its 15-bit structure are changed and the interaction between p53 and its 15-bit structure is easy to be solved.

项目成果

Sakaguchi, K. et al.: "Structural Characterization of Phe Residues in the P53 Tetramerization Domain"Peptide Science 2001. (in press).

Sakaguchi, K. 等人：“P53 四聚化结构域中苯丙氨酸残基的结构表征”肽科学 2001 年。（出版中）。

Kar, S.et al.: "Effect of Phosphorylation on the Structure and Fold of Transactivation Domain of p53"J. Biol. Chem.. (In press).

Kar, S.et al.：“磷酸化对 p53 反式激活域结构和折叠的影响”J。

Kodama, A.: "Characteristic Intra-and Intermolecular Interactions of Dipeptide-Chymotrypsin Complex as Specific Structural Essentials for Enzyme Inhibition"Peptide Science 2001. (in press).

Kodama, A.：“二肽-胰凝乳蛋白酶复合物的特征性分子内和分子间相互作用作为酶抑制的特定结构要素”肽科学 2001 年。（出版中）。