E‐Life構築を目指したD型タンパク質翻訳系の開発

开发D型蛋白质翻译系统，构建E-Life

• 批准号: 21651088
• 负责人: 坂口 和靖
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21651088/
• 关键词: タンパク質; リボソーム; 翻訳; 鏡像体; スクリーニング; 複合体形成

生命はL型アミノ酸から構成されるタンパク質とD型デオキシリボースを含むDNAから構成されている。このように、生物学的経路の中心の役割を担うタンパク質とDNAはホモキラリティーが確立しており、その選択性が厳密に制御されている。しかしながら、L型タンパク質とD型タンパク質問、あるいはD型タンパク質同士の相互作用について実験的に解き明かされた報告はほとんどない。これらを解明するためには、L型タンパク質だけではなく、D型のタンパク質を用いた解析が必須であるが、天然のリボソームではD型アミノ酸などの非天然アミノ酸をペプチド鎖に組み込むことが出来ず、タンパク質翻訳により非天然の生体分子を得ることは不可能である。本研究では、D型タンパク質翻訳系の確立を目指し、『D型アミノ酸をペプチド鎖に組み込むことの出来るリボソームの開発』を目的とする。前年度までにペプチド結合転移反応の反応中心であるペプチジルトランスフェラーゼセンター(PTC)を変異させたランダム変異ライブラリーを作製するため、23SrRNAのDNA配列を含むrrnBオペロンをクローニングしている。本年度は、リボソーム立体構造の詳細な解析結果により決定した二カ所の部位(2444-2449位と2498-2535位)にランダム変異を導入する手法としてランダムプライマー法を用い、1.rrnBオペロン全体をPCRで増幅する方法および2.変異導入部位周辺をPCRで増幅した後、全長rrnBオペロンへと組み込む方法の二つの方法を実施した。その結果、1.rrnBオペロン全長をPCRで増幅する手法がrrnBランダム変異ライブラリーの作成に適していることが明らかとなった。この手法を用い、PTCにランダム変異を組み込んだrrnBライブラリーの作製法を確立した。

Life は L ア ミ ノ acid か ら constitute さ れ る タ ン パ ク qualitative と type D デ オ キ シ リ ボ ー ス を containing む DNA か ら constitute さ れ て い る. こ の よ う に, biology 経 の way の center "を cut bear う タ ン パ ク qualitative と DNA は ホ モ キ ラ リ テ ィ ー が establish し て お り, そ の sentaku sex が 厳 dense に suppression さ れ て い る. し か し な が ら, L タ ン パ ク qualitative と type D タ ン パ ク questioned, あ る い は type D タ ン パ ク qualitative interaction with people の に つ い て be 験 に solution き Ming か さ れ た report は ほ と ん ど な い. こ れ ら を interpret す る た め に は, L タ ン パ ク qualitative だ け で は な く, D type の タ ン パ ク qualitative を with い た parsing が must で あ る が, natural の リ ボ ソ ー ム で は type D ア ミ ノ acid な ど の unnatural ア ミ ノ acid を ペ プ チ ド lock に group み 込 む こ と が ず, タ ン パ ク qualitative double 訳 に よ り unnatural の raw body molecules are を る こ と は impossible Youdaoplaceholder0. This study で は, D type タ ン パ ク qualitative double 訳 を refers is の established し, "type D ア ミ ノ acid を ペ プ チ ド lock に group み 込 む こ と の out る リ ボ ソ ー ム の 発" を purpose と す る. Before the annual ま で に ペ プ チ ド inverse planning move 応 の anti 応 center で あ る ペ プ チ ジ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ セ ン タ ー (PTC) を - different さ せ た ラ ン ダ ム - different ラ イ ブ ラ リ ー を cropping す る た め, 23 srrna の DNA match column を containing む rrnB オ ペ ロ ン を ク ロ ー ニ ン グ し て い る. This year は, リ ボ ソ ー ム three-dimensional structure の detailed analytical results に な よ り decided し た second カ の parts (2535) 2444-2449 と 2498 - に ラ ン ダ ム - different を import す る gimmick と し て ラ ン ダ ム プ ラ イ マ ー method を い, 1. RrnB オ ペ ロ ン all を PCR で rights of す る method お よ び 2. After the mutation introduction site week 辺をPCRで increase amplitude <s:1> た, full-length rrnB ペロ ペロ へと へと group み込む method <s:1> two method を implementation た. そ の results, 1. RrnB オ ペ ロ ン span を PCR で rights of す る gimmick が rrnB ラ ン ダ ム - different ラ イ ブ ラ リ ー の made に optimum し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. こ の gimmick を い, PTC に ラ ン ダ ム group - different を み 込 ん だ rrnB ラ イ ブ ラ リ ー の method for を establish し た.

项目成果

Effect of Peptide Oligomerization Mediated by p53 Tetramerization Domain on Biomineralization Activity

p53 四聚化结构域介导的肽寡聚化对生物矿化活性的影响

• 发表时间: 2011
• 期刊: Peptide Sci.
• 作者: T. Sakaguchi;R. Kamada;and K. Sakaguchi
• 通讯作者: and K. Sakaguchi

Low Threshold of Destabilization for Loss of Tumor Suppressor Activity of p53 : A Quantitative Analysis of p53 Tetramerization Domain Mutants.

p53 肿瘤抑制活性丧失的不稳定低阈值：p53 四聚化结构域突变体的定量分析。

• 发表时间: 2011
• 期刊: Peptide Science
• 影响因子: 2.4
• 作者: Ono;E.;Homma;Y.;Horikawa;M.;Kunikane-Doi;S.;Imai;H.;Takahashi;S.;Kawai;Y.;Ishiguro;M.;Fukui;Y.;Nakayama,T;R.Kamada
• 通讯作者: R.Kamada

生体内タンパク質発現レベルでの癌抑制タンパク質p53細胞内転写活性解析

抑癌蛋白p53体内蛋白表达水平的细胞内转录活性分析

• 发表时间: 2009
• 作者: S. Ohshima;et al
• 通讯作者: et al

Drastic Effects on Fibril Formation of Amyloid-beta Peptides by the Addition of Amino Acid Residue Units to the Termini

通过在末端添加氨基酸残基单元对淀粉样β肽原纤维形成产生巨大影响

• 发表时间: 2010
• 期刊: Protein Pept.Lett. 17(4)
• 作者: Asanomi;Y.;Kobayashi;Y;Sakai;H.;Masuda;T.;Chen;X.;Chuman;Y.;Uosaki;K.;Sakaguchi;K.
• 通讯作者: K.

Development of Probed-SCAP Directed at Thiol Groups

针对硫醇基团的 Probed-SCAP 的开发

• 发表时间: 2010
• 期刊: Peptide Science
• 影响因子: 2.4
• 作者: Watanabe;et al.
• 通讯作者: et al.