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モデル膜(リポソーム)を用いた蛋白質性溶血毒素の膜障害機構の解析

利用模型膜（脂质体）分析蛋白质溶血毒素的膜损伤机制

基本信息

批准号：
62480152
负责人：
保田立二
金额：
$ 3.46万
依托单位：
Okayama University (1988)The University of Tokyo (1987)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至 1988
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ブドウ球菌α毒素の膜障害作用をリポソームを用いて解析した。得られた結果から、(i)極性残基にコリンを有するリン脂質(:ホスファチジルコリンやスフィンゴミエリン)が、α毒素を特異的に結合する膜成分であること、(ii)膜に結合したα毒素の存在状態として、溶血活性を保持した可逆的結合状態と、溶血活性を失った非可逆的結合状態が存在すること、(iii)非可逆的結合状態への移行は、膜が流動的な状態(液晶状態)にある時にのみ進行するなどが明らかになった。(2)腸炎ビブリオの重要な病原因子である耐熱性溶血毒素(TDH)のレセプターについて検討した。^<125>I標識したTDHを用いて、ヒト赤血球へのTDHの結合を測定した結果から、TDHとヒト赤血球の結合定数2×10^4M^<-1>、赤血球1個当りの最大結合数9×10^6であった。また、リポソーム膜に組み込んだガングリオシドGT1bによるTDH中和能を測定したところ、TDH1分子当り10^4分子のGT1bが存在しても、ほとんど中和反応は起らなかった。これらの結果は、ガングリオシドが赤血球膜のTDHレセプターであるとする従来の報告とは一致せず、TDHレセプターの分子種について再検討する必要があることを示している。(3)ストレプトリジンO(SLO)の膜障害作用によってリポソームの内部マーカーが放出されることを利用して、血清中の抗ストレプトリジンO抗体価(ASO)定量法を開発した。検査室で頻繁に用いられているランツ・ランダル法の欠点は、用いるウサギ赤血球が不安定で保存できないこと、赤血球のSLO感受性がウサギ個体間で一定しないことである。これに対して、リポソームは安定で、しかも品質管理が容易である。新しい方法によって測定したASO価は、ランツ・ランダル法で得られた値とも良く一致している。

(1)The membrane barrier effect of the alpha toxin of the bacterium is analyzed by the method of purification. The results were as follows: (i) membrane components with specific binding of alpha toxin to polar residues;(ii) membrane binding; presence of alpha toxin; maintenance of hemolytic activity; irreversible binding; and (iii) irreversible binding; migration of membrane; and (iv) temporal progression of alpha toxin. (2)An important pathogenic factor for enteritis is heat resistant hemolytic toxin (TDH). <125>The binding of TDH to erythrocytes was determined by using TDH and TDH. The binding number of TDH to erythrocytes was 2× 10^4 M ^<-1>, and the maximum binding number of erythrocytes was 9×10^6 M ^. TDH neutralisation energy was determined when TDH1 molecule existed in GT1b of TDH 10^4 molecule. The results of this study were consistent with those of the previous study, which showed that the molecular species of TDH in red blood cell membrane were closely related. (3)A quantitative method for the determination of anti-SLO antibodies in serum was developed. The SRO sensitivity of red blood cells is dependent on the individual. The quality management system is very stable and easy. The new method is to determine whether the ASO is correct or not.