骨格筋虚血と再潅流後の腎障害

再灌注后骨骼肌缺血和肾损伤

• 批准号: 03807076
• 负责人: 神谷 喜八郎
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03807076/
• 关键词: MNMS; 再潅流障害; 骨格筋虚血; MTT; MTT assay; reperfusion; 急性動脈閉塞

本研究は少量骨格筋を用いた筋細胞viabilityの定量的判定法の開発を目的とした。tetrazolium塩はミトコンドリア内膜の脱水素酵素により,有色のformazanを形成するが、筋細胞で生じたこのformazanを溶解し,比色定量する方法を検討した。以下,現在までの実験結果を含めた研究の過程と今後の見込みを述べる。1.研究過程と実験結果1.当初,tetrazolium塩としてNTBを使用したが,極めて難溶性であったので使用を断念し,MTTに変更した。2.MTT‐formazanはDMSOに易溶性であり,MTT含有反応液のpH:7.5〜8.0,反応液/DMSO比:1/9〜1/4,冷暗所保存で安定した測光値を示した。3.筋細胞を分離し,MTT‐formazanの溶解を速くする目的でcollagenaseを使用してみたが,formazan生成に影響を与えるので使用を放棄した。4.0.1mgまで測定可能な電子天秤を購入し,0.5〜5.0mgのマウス骨格筋を定量して使用した。5.マウス骨格筋の乾燥防止のため,研究室の湿度を上げる目的で加湿器を購入した。6.少量骨格筋で反応5分,formazan溶解約10分,遠沈5分,MTT‐formazan測光の測定系で,筋重量と測光値は比較的良好な相関を示した。2.今後の見込み最終結論には到っていないが,現在のところ,MTT assayによる筋細胞viabilityの定量的判定法の確立は有望であり,本法が確立されれば,少量の骨格筋採取から測定結果を得るまで約30分と短いので,臨床でも,急性動脈閉塞による骨格筋虚血の虚血程度の判定に使用しうる。

The aim of this study was to develop a quantitative method for determining the viability of small amount of tendon cells. Tetrazolium can be used to dissolve and quantify the enzyme in the membrane, and the formation of colored formazan. The following is a description of the present and future results of the study. 1. 1. At the beginning,tetrazolium was used in NTB, but it was not soluble in MTT. 2. MTT-formazan is soluble in DMSO,MTT contains a reaction solution pH:7.5 ~ 8.0, reaction solution/DMSO ratio:1/9 ~ 1/4, cold storage stability is measured. 3. The purpose of collagenase is to isolate tendon cells and to dissolve MTT formazan. 4.0.1mg may be used to determine the quantity of the electronic balance, 0.5 ~ 5.0mg may be used to determine the quantity of the muscle. 5. The humidity of the research room is increased by the purchase of a humidifier. 6. A small amount of tendon was dissolved by 5 points,formazan dissolved by about 10 points, and far sank by 5 points. MTT-formazan photometric measurement system showed good correlation between tendon weight and photometric value. 2. In the future, the final conclusion of MTT assay is expected to be established. The quantitative determination method of tendon cell viability is expected to be established. The results of a small amount of bone tendon samples are about 30 minutes short. In clinical practice, the determination of the degree of bone tendon deficiency and blood deficiency in acute coronary artery disease is expected to be used.