レクチンを用いた小腸細胞膜糖鎖蛋白の分離と消化吸収の分子化学的研究

利用凝集素分离和消化吸收小肠细胞膜糖链蛋白的分子化学研究

• 批准号: 04660092
• 负责人: 三崎 旭
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04660092/
• 关键词: チエリ・トマト; レクチン; 糖鎖認識; レクチン抗体; 小腸粘膜; 植物細胞壁

チェリー・トマト(Lycopersion esculentum var.Cherry)より二種の血球凝集性のレクチン(LEA-C-I,LEA-C-II)を精製した。LEA-C-Iは分子量130KDa、糖含量約50%であり、LEA-C-IIは分子量32KDa、糖含量約20%、両者とも糖鎖がAra:Gal:Man=94:3:3の糖蛋白の単量体であるが、マウス血球凝集活性はLEA-C-I>LEA-C-IIで比活性で約100倍の違いがあった。また、同じナス科でD-GlcNAc糖鎖に特異的な在来種のトマトレクチン(LEA)とジャガイモレクチン(STA)と糖結合特異性を比較したところ、LEA-C-IとLEAは[GlcNAc]_nの重合度に依存し、6糖>5糖>4糖>3糖>2糖の順に強い親和性を示した。LEA-C-IIとSTAは、6糖=5糖=4糖>3糖>2糖と、4糖以上のoligomerには同様の親和性を示すが、重合度依存性に違いがみられた。チェリートマトは日常的に生食されるが、Con Aなどと異なり毒性を示さない。invtroでの種々の糖質消化酵素に対する活性阻害、LEA-C-Iは動物のα-amylase、α-glucosidaseなど消化吸収に関係する酵素を阻害しなかった。一方、微生物のα-amylaseに対しては阻害を示した。先に作成した抗LEA-C-I兎ポリクローナルIgGを用いた蛍光抗体法によって、LEA-C-Iがラット小腸絨毛粘膜にbindingし、特に粘膜上皮のゴブレット細胞や絨毛の根元の腸腺など粘液分泌腺に特異的に結合することが分かった。この結合が[GlcNAc]_4によって阻害されたことより、LEA-C-Iの小腸上皮組織に対するbindingはこれらの組織に局在する糖鎖のbisectingのGlcNAc鎖を認識することが示唆された。本レクチンをリガンドとするaffinity cloumnを作成し、これを用いてLEA-C-Iの認識する小腸上皮細胞表層の糖鎖の分画、精製を行っているが、少なくとも胃粘膜Mucinを結合することが確認されており、消化膜の糖蛋白の分画は未だ成功していない。また、本抗体を用いて、レクチンが植物組織内の細胞壁、特に導管(維管束)の2次細胞壁に局在することが分かった。

Lycopersion esculentum var. Cherry, Lycopersion esculentum var. LEA-C-I has a molecular weight of 130KDa and a sugar content of approximately 50%. LEA-C-II has a molecular weight of 32KDa and a sugar content of approximately 20%. Ara:Ga l:Man=94:3:3 The specific activity of glycoprotein is about 100 times higher than that of hemagglutination activity of MAS.また、The same じナスfamilyでD-GlcNAc sugar binding specificity ratio Comparatively, LEA-C-I and LEAは[GlcNAc]_n depend on the degree of overlap, and the affinity of 6 sugars > 5 sugars > 4 sugars > 3 sugars > 2 sugars is strong and the affinity is shown. LEA-C-II and STAは, 6 sugars = 5 sugars = 4 sugars > 3 sugars > 2 sugars と, 4 sugars and above のoligomer には Same 様 の affinity を す が, overlap dependence に い が ら れ た.チェリートマトはDaily raw food されるが, Con Aなどとdifferent なりtoxicity をshow さない. Invtro is a glycodigestive enzyme that inhibits activity, LEA-C-I is an animal's α-amylase, and α-glucosidase is a enzyme that blocks digestion and absorption. On the one hand, microbial α-amylase does not harm the microorganisms. We first produced anti-LEA-C-I がポリクローナルIgGを using the いた蛍photoantibody method によって, LEA-C-I がラットsmall intestinal villous mucosaにbinding し、Special にゴブレットcells of the mucosal epithelium やVillus のroot element のIntestinal glands などMucus secretion gland にSpecific にることが分かった.この合が[GlcNAc]_4によってblocking されたことより、LEA-C-Iのsmall intestinal epithelial tissue に対するbin dingはこれらのorganizing bureau in するsugar lock のbisecting のGlcNAc lock を recognize することがshows instigation された.本レクチンをリガンドとするaffinity Cloumnをmadeし、これを UseいてLEA-C-IのcognitionするGlycose lock on the surface of small intestinal epithelial cellsのpainting、refinedを行っているが, less なくともgastric mucosa Mucin をcombination することがconfirmation されており, digestive membrane のglycoprotein の画は不だsuccess していない.また, this antibody is designed to use いて, レクチンがcell walls and special ducts (vascular bundles) of secondary cell walls in plant tissues.

项目成果

斉藤 景子・八木 洋美・三崎 旭: "チェリー・トマト(Lycopersicon eulentum Var Cherry)レクチンの生化学的性質および免疫組織学的研究" 第15回糖質シンポジウム集. (1993)

Keiko Saito、Hiromi Yagi 和 Asahi Misaki：“樱桃番茄 (Lycopersicon eulentum Var Cherry) 凝集素的生化特性和免疫组织学研究”第 15 届碳水化合物研讨会集（1993 年）。