糖鎖認識抗体を利用した植物細胞壁の高次構造解析

使用糖链识别抗体对植物细胞壁进行高阶结构分析

• 批准号: 61560104
• 负责人: 三崎 旭
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61560104/
• 关键词: α-L-Araf抗体; 植物細胞壁; L-Araf系多糖

多くの糖結合性レクチンが多糖や複合糖質の研究に利用されて来た。然し植物組織壁多糖などに広く分布するα-L-アラビノフラノース(α-L-Araf)を認識するレクチンは見出されていない。本研究では、細胞壁多糖の側鎖末端のα-L-Arafに特異的な蛋白質を抗体産生を利用して得ること、これをα-L-Araf系多糖の免疫化学および組織化学的研究に応用する事を目的とした。1.α-L-Arafに特異的な抗体は、α-L-Arafのp-アミノフェニル誘導体と蛋白(BSA)を結合させて得たα-L-Araf-BSAを抗原として兎を免疫することにより調製した。2.得られた抗血清は、α-L-Araf-BSA、BSAのほかアジバント物質中のα-D-Arafとも若干反応したので精製を行った。最終的には、α-L-Arafをリガンドとしたクロマトグラフィーにより単一なIgGとして精製し得た。此の抗体はα-L-Arafに特異的で、植物アラビノガラクタン,アラビノキシラン及び、化学合成的にα--L-Arafで枝をつけたアラビノグルカンと強く反応するが、反応の強さはα-Araf側鎖部分の分布、長さなどにより影響されることが示唆された。3.α-L-Araf抗体を植物細胞壁中のα-Araf多糖の組織化学的識別に応用した。すなわち、植物組織超薄切片を抗体で処理後、FITC又は酵素(Peroxidase)標識二次抗体を定着させ、顕微鏡下の観察に供した。大豆などの豆種子の子葉,米胚乳などの組織に応用した結果、α-L-Araf含有多糖の分布、局在を明確に識別し、細胞壁高次構造の研究に役立つ事が分った。4.現在、此の方法を発展させて植物細胞壁の重要な構成多糖であるキシログルカンの糖鎖認識抗体の研究展開中である。

Study on the utilization of polysaccharide and complex glycans with polysaccharide-binding properties. However, the distribution of polysaccharides in plant tissue wall is not obvious. The purpose of this study is to investigate the use of α-L-Araf-specific proteins at the lateral locking ends of cell wall polysaccharides for antibody production, immunochemistry and histochemistry of α-L-Araf-based polysaccharides. 1.α-L-Araf specific antibodies bind to α-L-Araf protein inducer (BSA) and produce α-L-Araf-BSA antigen. 2. The antiserum α-D-Araf and BSA were purified. Finally, the α-L-Araf was refined into IgG. This antibody is α-L-Araf specific, plant specific, and chemically synthesized α-L-Araf, and is strongly influenced by the distribution and growth of α-Araf side-locked moieties. 3.α-L-Araf antibodies are useful for histochemical recognition of α-Araf polysaccharides in plant cell walls. After treatment with antibodies, FITC and enzyme (Peroxidase) identification of secondary antibodies, and observation under microscope Soybean seed cotyledons, rice endosperm tissues, results, distribution of α-L-Araf polysaccharides, identification of the site, and study of cell wall structure. 4. At present, this method has been developed and the study of glycan recognition antibody of polysaccharide, an important component of plant cell wall, is under way.