血管内皮細胞上でのstaphylokinaseによる酵素活性発現の解析

血管内皮细胞葡激酶酶活性表达分析

• 批准号: 04670057
• 负责人: 松尾 理
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670057/
• 关键词: staphylokinase; plasminogen; plasminogen複合体; plasminogen activator; fibrin; α2-plasmin inhibitor; 血管内皮細胞; plasminogen receptor

Staphylococcus aureusが生産するstaphylokinase(SAK)はplasminogenと複合体を形成して酵素作用を有するplasminogen activator(PA)になる。このSAKのfibrinおよび血管内皮細胞上におけるPA活性発現機序について解析した。SAKは大腸菌で発現させたrecombinant体を精製して用いた。SAKはplasminogenと架橋剤DSSの存在下で反応させ、分子量11万の安定した複合体SAK/plasminogen complex(以下複合体)を得た。この複合体はSAKとplasminogenの等モル混合液と同様に十分なPA活性を有し、α2-plasmin inhibitor(α2-PI)により阻害された。しかし、fibrin様物質(CNBr-fibinogen分解産物、FCB-2)存在下ではα2-PIの阻害を受けなかった。また、複合体はFCB-2存在下で約5倍活性増強を示した。さらに重合fibrinのplasmin分解産物(DD fragment)でも活性増強作用を示した。このことよりSAKの複合体はそのplasminogen側のLSBを介してfibrinに結合しfibrin上でα2-PIの阻害を受けずPA活性を発現すると推測される。対照に用いたstreptokinaseとplasminogenの複合体では、α2-PIによる阻害におけるFCB-2の効果および活性増強効果は弱かった。また、血管内皮細胞上におけるSAKの反応様式を結合実験により検討した。SAKおよび複合体はIodogen法により^<125>I放射標識させて用いた。血管内皮細胞はヒト臍帯静脈より分離し20%FCSを含む培地を用い96穴プレートで培養し実験に供した。^<125>I-SAKは血管内皮細胞には結合しなかったが、^<125>I-複合体は結合した。また、予めヒトplasminogenを結合させた内皮細胞に対して^<125>I-SAKは結合した。両者の結合は濃度依存的で特異的であった。さらに、内皮細胞に結合したSAKは十分なPA活性を発現し、FCB-2により増強した。以上よりSAKは血管内皮細胞上のplasminogen receptorに結合しているplasminogenを介して結合しPA活性を発現すると推測される。従って血管内皮細胞上で、fibrin/plasminogen/SAK複合体が形成されPA活性が効果的に発現すると思われる。

Staphylococcus aureusが produces するstaphylokinase(SAK) が plasminogenと complex を forms <s:1> て enzymes and を has the function of するplasminogen activator(PA)になる. <s:1> <s:1> SAK および fibrinおよび the mechanism of におけるPA activity on vascular endothelial cells にお よび て て analysis of <s:1> た. SAK て escherichia coli で occurrence させたrecombinant form を refinement <s:1> て use た た. In the presence of the SAK <s:1> plasminogenと bridging agent DSS <s:1>, the で anti応 させ and the 110,000 molecular weight <s:1> stable <s:1> た complex SAK/plasminogen complex(the following complex)を obtain た. こ の complex は SAK と plasminogen の etc モ ル mixture と with others very な に を し, alpha 2 - PA activity plasmin inhibitor (alpha 2 - PI) に よ り resistance against さ れ た. し か し, fibrin others material (CNBr - fibinogen breakdown products, FCB - 2) in the presence of で は alpha 2 - PI の resistance against を by け な か っ た. Youdaoplaceholder0 in the presence of the complex また FCB-2, the activity of で increased by approximately five times を, indicating that た た. Youdaoplaceholder0 The activity enhancement effect of the coincident fibrin <s:1> plasmin decomposition product (DD fragment)で さらに を shows that を た. こ の こ と よ り SAK の complex は そ の plasminogen side の LSB を interface し て fibrin に combining し で alpha 2 - PI on fibrin の resistance against を by け ず PA active を 発 now す る と speculation さ れ る. According to に seaborne い た streptokinase と plasminogen の complex で は, alpha 2 - PI に よ る resistance against に お け る FCB - 2 の unseen fruit お よ び activity raised strong working fruit は weak か っ た. Youdaoplaceholder0, におけるSAK on vascular endothelial cells <s:1> anti応 pattern を combined with experiment によ 検 to seek た. SAKおよび complex Iodogen method によ によ ^<125>I radiolabeling させて using および た. Umbilical 帯 venous endothelial cells は ヒ ト よ り separation し 20% FCS を containing む petty を い 96 hole プ レ ー ト で cultivate し be 験 に for し た. ^<125>I-SAK <s:1> vascular endothelial cells に に bind to な な ったが ったが, ^<125> i-complex bind to た た. Youdaoplaceholder0 binding めヒトplasminogenを to させた endothelial cells に against て て^<125>I-SAK を binding to た た. The two are で specific であった in combination with で concentration dependence. Youdaoplaceholder0, endothelial cells に bind to <s:1> たSAK に very なPA activity を occurs に, FCB-2によ enhances た た. Above よ り SAK は endothelial cells の plasminogen receptor に combining し て い る plasminogen を interface し て combining し PA active を 発 now す る と speculation さ れ る. The で and fibrin/plasminogen/SAK complexes on 従って vascular endothelial cells が form されPA activity が effect に occurrence すると thought われる.

项目成果

岡田 清孝: "新しい血栓溶解剤スタフィロキナーゼ" 日本血栓止血学会誌. 3. 136-140 (1992)

Kiyotaka Okada：“一种新的血栓溶解剂葡萄激酶”日本血栓和止血学会杂志 3. 136-140 (1992)。

岡田 清孝: "Staphylokinaseのplasminogen活性化におよぼすα_2-plasmin inhibitorの影響" International Journal of Hematology. 55. 290- (1992)

Kiyotaka Okada：“α_2-纤溶酶抑制剂对葡萄激酶纤溶酶原激活的影响”国际血液学杂志 55. 290- (1992)

Okada.K: "Plasminogen activation by cross-linked staphylokinase-plasminogen complex" Fibrinolysis. 6. 84- (1992)

Okada.K：“交联葡萄球菌激酶-纤溶酶原复合物激活纤溶酶原”纤维蛋白溶解。

岡田 清孝: "Staphylokinase/plasminogen複合体に対するα_2-plasmin inhibitorの影響" 臨床血液. 33. 1638- (1992)

Kiyotaka Okada：“α_2-纤溶酶抑制剂对葡萄激酶/纤溶酶原复合物的影响”临床血液学。 33. 1638- (1992)

岡田 清孝: "Staphylokinase/plasminogen複合体のfibrin特異性" 日本血栓止血学会誌. 3. 367- (1992)

Kiyotaka Okada：“葡萄激酶/纤溶酶原复合物的纤维蛋白特异性”日本血栓和止血学会杂志 3. 367- (1992)。