Extracellular matrixの酵素活性制御機序

细胞外基质酶活性控制机制

• 批准号: 03670045
• 负责人: 松尾 理
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670045/
• 关键词: ヒト臍帯静脈内皮細胞; tーPA; PAIー1; tーPA・PAIー1; ECM; Plasminogen activation; Fibrinolytic activity

ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)の培養系を用い、細胞をfibrin,PMATNF,ILー1で刺激した場合の細胞上清液(CM),細胞溶解液(CL),およびECMの3画分のtーPA,PAIー1,およびtーPA・PAIー1抗原量、tーPAによPA活性を測定し、ECMでの酵素学的機能の特微を明らかにした。PMA刺激(500nM)でCMにはcontrolに比べ約15倍量のtーPA抗原が放出されたが、fibrin,TNF(50U/ml),ILー1(5U/ml)では有意な変動はなかったこの時CL,ECMのtーPA抗原量にも変動はなく、CMの約1/3のレベルであった。一方、fibrin刺激でCMのPAIー1原量はcontrolに比べ、約1/4に減少したが、PMA,TNF,ILー1でいずれも顕著な増加(1.8ー2.5倍)がみられた。この時CLでもCMと類似の刺激物質によるPAIー1の増減がみられたが、ECMではほどんど変動はなくCMの抗原量の約1/5のPAIー1蓄積量を示した。Enzymography法および合成基質法によりtーPA活性を測定したところ、CMとCLではPAIー1に対するtーPAの比率とtーPA活性とはいずれの刺激物質においても正相関を示した。すなわちtーPA/PAIー1比率が増加するに伴いtーPA活性も増加した。一方、ECMでは必ずしも相関はせず、ECMにおけるtーPAあるいはPAIー1の活性を制御する機構の存在が示唆された。各画分でのtーPA比活性(活性/抗原量)を算出するといずれの群でもECMではCMより高い値を示した。さらにtーPAの総活性(CM,CL,ECMの和)に占めるECMのtーPA活性はcontrol,fibーrin,PMA,TNF,ILー1で26,36,13,31,41%であり、CMの占める活性は同順に49,46,21,20,48%であった。このようにECMではtーPA,PAIー1抗原量がCMに比べて少ないにもかかわらず細胞周辺の総PA活性に占める割合は大きく、また生理活性物質刺激による総tーPA活性の変動にECMでのtーPA比活性が関与することから、ECMが細胞の酵素活性発現の場として重要な制御機能を有していると考えられる。

Cultured umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were used in vitro, and cell culture was stimulated with fibrin,PMATNF,IL-1, cell supernatant (CM), cell lysate (CL), and three components of ECM: t PA,PAI-1, t PA·PAI-1 antigen, t PA activity, and ECM enzymatic function were examined. PMA stimulation (500nM) caused CM to release about 15-fold more t PA antigen than CM control. Fibrin,TNF(50U/ml),IL 1(5U/ml) caused CM to release about 1/3 of t PA antigen. In addition, the amount of CM and PAI-1 decreased by about 1/4 compared with control group, PMA,TNF,IL-1 increased by 1.8 to 2.5 times. The increase of PAI-1 in CL and similar stimulants in ECM was about 1/5 of that in CM. Enzymography method and synthetic matrix method are used to determine the ratio of tPA activity and tPA activity. The PA/PAI ratio increased, accompanied by an increase in PA activity One side, ECM must be present in the presence of a mechanism to control PAI-1 activity. tPA specific activity (activity/antigen amount) for each component is calculated. The total activity of t-PA (CM,CL,ECM) accounted for 26,36,13,31,41% of the total activity of t-PA (CM,CL,ECM) and 49,46,21,20,48% of the total activity of t-PA (CM, CL, ECM). The amount of t-PA,PAI-1 antigen in ECM is less than that in CM, and the activity of t-PA in ECM cells is greater than that in CM cells, and the activity of t-PA in ECM cells is greater than that in CM cells. The activity of t-PA in ECM cells is stimulated by physiologically active substances.

项目成果

深尾 偉晴,松尾 理: "血管内皮細胞へのフィブリン刺激によるtーPA,PAIー1放出機序の解析" 血管(Japanese Journal of Circulation Research). 15. 17- (1991)

Hideharu Fukao、Osamu Matsuo：“纤维蛋白刺激血管内皮细胞的 t-PA、PAI-1 释放机制的分析”Vascular（日本循环研究杂志）。