大腸菌耐熱性下痢原因毒素IIの活性と構造に関する研究

大肠杆菌耐热腹泻毒素II的活性与结构研究

• 批准号: 04670261
• 负责人: 岡本 敬の介
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokushima Bunri University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670261/
• 关键词: 大腸菌; 不痢原因毒素; 化学修飾; 遺伝子操作; プロスタグランジン; ELISA

毒素原性大腸菌が産生する耐熱性下痢原因毒素II(STII)を完全に精製し、その活性を中和する抗体を得た。本抗体を用いて検討した結果、STIIはSTIやLTとは抗原性がまったく異なる毒素であることがわかった。さらに最近本抗体を用いてELISAの系の開発にも取組み、信用できる系がほぼ完成した。この開発した系を用いると、STIIの定性、定量を簡単にしかも正確におこなうことができるので,STII研究に大きく貢献したと考えている。またこれらの系を応用してSTIIの作用機構を検討した結果、プロスタグランジンがSTIIの活性発現の細胞内メディエーターとなっている可能性が示され、今後のSTIIの作用機作の解析に重要な手がかりが得られた。さらにSTIIの活性構造相関を調べるため、化学修飾法および遺伝子操作を用いて、STIIが活性を発現するために必要な構成アミノ酸について検討をした。毒素の等電点の測定や化学修飾の結果からSTIIを構成しているアミノ酸のなかで陽電荷アミノ酸が活性に寄与していることが判明した。選択性の強い化学修飾法でさらに解析をすすめると、リジン残基が活性に重要であることがわかった。そこで遺伝子操作でリジン残基の置換を試みた。すなわち部位特異変異法でこれらのリジン残基を置換した遺伝子を作成し、これらの変異株が産生する変異STIIを精製し、毒素活性を測定した。その結果22位、23位のリジン残基が活性に重要であることが判明した。

Toxin-producing E. coli produces heat-resistant diarrhea causing toxin II(STII), which is completely purified and neutralizes its activity. This antibody is used to detect the results, STII and LT antigenicity. Recently, the development of the ELISA system using this antibody has been completed. The qualitative and quantitative aspects of STII research have contributed greatly to the development of STII. The results of the study of the mechanism of action of STII in the system of STII showed the possibility of intracellular mechanism of activity of STII in the system of STII in the future, and the analysis of mechanism of action of STII in the future was important. In addition, STII activity structure related to modulation, chemical modification and molecular manipulation, STII activity to develop, necessary for the composition of the acid in the study Determination of isoelectric point of toxin and chemical modification of STII Selective chemical modification is important for the analysis of residues. Try to replace the residues in the genetic manipulation of. A site-specific method was used to determine the activity of the toxin and to purify the mutant. As a result, residues at positions 22 and 23 were identified as important for activity.

项目成果

Shunji Hitotsubashi: "Some properties of purified Escherichia coli heat-stable enterotoxin II" Infection and Immunity. 60. 4468-4474 (1992)

Shunji Hitotsubashi：“纯化大肠杆菌热稳定肠毒素 II 的一些特性”感染和免疫。

Keinosuke Okamoto: "Identification and Characterization of Heat-Stable Enterotoxin II producing Escherichia coli from Patients with Diarrhea" Microbiology and Immunology. 37. (1993)

Keinosuke Okamoto：“腹泻患者产生热稳定肠毒素 II 的大肠杆菌的鉴定和表征”微生物学和免疫学。