大腸菌耐熱性下痢原因毒素の分泌機序の分子論的研究

大肠杆菌耐热腹泻毒素分泌机制的分子研究

• 批准号: 03670227
• 负责人: 岡本 敬の介
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokushima Bunri University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670227/
• 关键词: 大腸菌; 下痢原因毒素; 前駆体; 分泌; シグナルペプタイド; 膜透過

大腸菌耐性下痢原因毒素(ST)は効率よく菌体外に分泌されるが、その分泌機構は不明であった。報告者はSTが72個のアミノ酸よりなる前駆体ポリペプタイドとして合成されること、及び前駆体はpre領域、pro領域、成熟領域からなる3領域から構成されていることを前年度までに明かにした。そこで本年度はpro領域がSTの菌体外への分泌に関与しているか否か、さらにpro領域の機能を担うアミノ酸残基について検討を加え、以下の事実を明かにした。1.pro領域を欠損したST遺伝子を構築し、構築した遺伝子を有する菌が産生するSTの局在化と活性を調べた。その結果pro領域を欠損させると産生されるST量は約5分の1に減少することがわかった。この事実はpro領域がSTの分泌に関与していることを示している。2.融合遺伝子を作成し解析した結果、pro領域は下流の領域の内膜通過を促進していることが判明した。3.pro領域の機能発現に必要な構成アミノ酸残基について検討した。既に3種類のST遺伝子の塩基配列が決定されているので、これらのSTのpro領域の配列を比較した。その結果3種類のSTともに高度に保存されている領域と保存されていない非保存領域が存在することがわかった。そこで保存領域および非保存領域をそれぞれ削除した遺伝子を構築しSTの分泌を調べた。非保存領域(41ー53位)を削除してもSTの分泌量は低下しなかったが、保存領域(29ー38位)を削除すると、STの分泌量は1/4に低下した。この事実は保存領域を構成するアミノ酸残基がpro領域の機能発現に必須であることを示している。

E. coli tolerance toxin (ST) secretion rate in vitro, secretion mechanism unknown The reporter reported that 72 of the precursors were synthesized in the pre-, pro-and mature fields, respectively. This year, the pro domain is related to the secretion of ST in vitro, and the function of pro domain is related to the detection of acid residues. The following things are clearly stated. 1. In the pro domain, there is a shortage of ST genes, and the construction of ST genes has a positive effect on the production of ST genes. As a result, the loss of the pro field is reduced by about 5 minutes. This is the first time I've ever seen a woman in my life. 2. The fusion gene is produced by analyzing the result, pro field and inner membrane of downstream field. 3. Pro-domain function development is necessary to form the amino acid residue. The base arrangement of the three types of ST genes is determined by comparing the base arrangement of the three types of ST genes with that of the three types of ST genes. The result is that there are three kinds of highly conserved domains: The preservation of the domain and the non-preservation of the domain are the key to the construction of the domain. The secretion of ST decreased by 1/4 when the non-preserved domain (41 - 53) was deleted, and the secretion of ST decreased by 1/4 when the preserved domain (29 - 38) was deleted. This process is necessary for the functional development of the domain of the amino acid residue.

项目成果

Hiroyasu Yamanaka: "Secretion Analysis of Heat-Stable Enterotoxin in Escherichia coli" Advances in Research on Cheolera and Related Darrrhea. 10. (1992)

Hiroyasu Yamanaka：“大肠杆菌热稳定肠毒素的分泌分析”Cheolera 和相关腹泻研究进展。