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大腸菌耐熱性エンテロトキシンIIのジスルフィド結合の形成とレセプターの解析

大肠杆菌耐热肠毒素II二硫键形成及受体分析

基本信息

批准号：
07670330
负责人：
岡本敬の介
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tokushima Bunri University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670330/
关键词：
大腸菌下痢毒素レセプター立体構造遺伝子操作

项目摘要

毒素原性大腸菌の耐熱性エンテロトキシンII(STII)は48個のアミノ酸からなる、分子内に2本のジスルフィド結合を有する毒素である。このジスルフィド結合はSTIIの活性構造を構築する第一の要因である。このジスルフィド結合が毒素の成熟化のどの段階で、どのようにして架橋されるのかを検討した。その結果(1)dsbA遺伝子を欠損した変異株ではSTIIが産生されないこと、(2)変異株でのSTIIの産生抑制はdsbA遺伝子の導入で回復すること、(3)dsbA欠損株においてもSTIIは生合成され、ペリプラスム内に運ばれてくるが、このSTIIはペリプラスム内ですぐに分解されること、(4)2本のジスルフィド結合のうち、21-36位に架橋されているジスルフィド結合が毒素の安定性に重要であること、(5)ジスルフィド結合が架橋していないSTIIは14位と15位の間で切断をうける、ことなどが明らかになった。これらの結果からSTIIのジスルフィド結合はDsbAによって架橋されており、その架橋はSTIIの活性構造の構築に必要であるばかりでなく、STIIが分泌される構造を構築するためにも必要であることが明らかになった。STIIが毒素活性を発現するためには、腸管上皮細胞のレセプターに結合しなくてはいけない。申請者たちは腸管細胞の膜画分にSTIIに結合する分子量2万タンパク質を見出し、このタンパクをほぼ精製した。精製したタンパクにSTIIは特異的に結合す。LTやSTI、あるいは培地成分などは結合しないことが明らかとなり、このタンパクがSTIIのレセプタープロテインとして機能している可能性を示唆した。

The heat resistance of toxin-producing Escherichia coli (STII) is 48 amino acids, 2 amino acids and 2 amino acids. The first important factor in the construction of STII active structure is the combination of STII and STII. This is the first time that the toxin has matured. The results were as follows: (1) The production of STII in the mutant plants with defective dsbA gene was inhibited;(2) The production of STII in the mutant plants was inhibited;(3) The production of STII in the mutant plants was inhibited;(4) The production of STII in the mutant plants was inhibited;(5) The production of STII in the mutant plants was inhibited;(6) The production of STII in the mutant plants was inhibited;(7) The production of STII in the mutant plants was inhibited;(8) The production of STII in the mutant plants was inhibited;(9) The production of STII in the mutant plants was inhibited; The 21-36 position bridge is important for toxin stability.(5) The 21- 36 position bridge is important for toxin stability.(5) The 21 - 36 position bridge is important for toxin stability. As a result, the structure of STII is necessary for the construction of DsbA, DsbA and DsbA. STII also binds to intestinal epithelial cells to produce toxin activity. The applicant has a molecular weight of 20,000 in the membrane fraction of intestinal cells. Refined and unique combination of STII The possibility of STI and STII is demonstrated.