肝内胆汁うっ滞の分子生物学的解析

肝内胆汁淤积的分子生物学分析

• 批准号: 04670404
• 负责人: 石井 元康
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670404/
• 关键词: 肝内胆汁うっ滞; ミオシンリン酸化

平成4年度の研究テーマは、(1)毛細胆管収縮とミオシンのリン酸化定量(2)肝細胞アクチンの重合率、臨界濃度の測定 であった。研究結果を略述する。(1):48時間培養肝細胞に膜透過性を与える至適濃度の検討を、種々のサポニン濃度とインキュベーション時間を用いて、肝細胞のトリパン・ブルー取り込み率とFITC-labelled Phalloidinの染色性で行なった。その結果、至適条件は、50μg/mlサポニンで10分間室温処理する事により得られた。この条件下で、細胞膜に透過性を与えた肝細胞に1mM CaCl_2、1mM ATPを添加すると、すべての肝細胞の毛細胆管が収縮した。そこで、ミオシンリン酸化と毛細胆管収縮の関係を、(^<32>P)ATPを用いて検討した。サポニン処理をした肝細胞に1mM CaCl_2と(^<32>P)ATPを含む1 mM ATPを投与した後、SDS-PAGEを行い、オートラジオグラフィーをイメージアナライザーシステムで解析した。CaCl_2とATP添加後の毛細胆管収縮に伴い20kDa myosin light chainがリン酸化され、カルモヂュリン阻害剤の同時投与により、毛細胆管の収縮とミオシンのリン酸化がいずれも阻止された。以上の結果より、毛細胆管の収縮はミオシンのリン酸化により毛細胆管周囲のアクチン線維がスライドするときに起こると考えられた。(2):ラット肝細胞よりアクチンを分離、精製する研究は、アクチンの回収率、精製に改良すべき点があり、現在も検討中である。 (1)の実験が予定通り進み、(2)の実験は技術的問題が残ったため、(1)を更に進め、人肝生検材料への応用をめざして、肝組織をホモジナイズした系でのミオシンリン酸化の測定を行なっている。

Pp.47-53 4 year の research テ ー マ は, (1) the capillary bile duct 収 shrinkage と ミ オ シ ン の リ ン acidification quantitative (2) liver cell ア ク チ ン の coincidence rate, critical concentration determination の で あ っ た. The research results を are briefly described as する. (1) : 48 time cultivating に liver cell membrane permeability and を え る to optimum concentration の beg を 検, kind of 々 の サ ポ ニ ン concentration と イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン time を い て, liver cell の ト リ パ ン · ブ ル ー take り 込 み rate と FITC labelled - Phalloidin の dyeing line で な っ た. Youdaoplaceholder0 そ results, to the optimum conditions そ, 50μg/mlサポニ サポニ で で for 10 minutes at room temperature, する work によ られた られた. こ の に で, under the condition of cell membrane permeability and を え 1 mm CaCl_2 に た liver cells, 1 mm ATP を add す る と, す べ て の hepatocellular の capillary bile duct が 収 shrinkage し た. そ こ で, ミ オ シ ン リ ン acidification と capillary bile duct 収 shrinkage の masato を, (^ < > 32 P) ATP を with い て beg し 検 た. サ ポ ニ ン 処 Richard を し た hepatocellular に 1 mM CaCl_2 と (^ < > 32 P) ATP を containing む 1 mM cast with ATP を し た, sds-page を い, after オ ー ト ラ ジ オ グ ラ フ ィ ー を イ メ ー ジ ア ナ ラ イ ザ ー シ ス テ ム で parsing し た. CaCl_2 と ATP の capillary bile duct after adding 収 shrinkage に with 20 kda い myosin light chain が リ ン acidification さ れ, カ ル モ ヂ ュ リ ン resistance against tonic の cast and に よ り, capillary bile duct の 収 shrinkage と ミ オ シ ン の リ ン acidification が い ず れ も stop さ れ た. の above results よ り, capillary bile duct の 収 shrinkage は ミ オ シ ン の リ ン acidification に よ り capillary bile duct weeks 囲 の ア ク チ ン line d が ス ラ イ ド す る と き に up こ る と exam え ら れ た. (2) : ラ ッ ト hepatocellular よ り ア ク チ ン を separation, refined す る research は, ア ク チ ン の 収 rate, refined modified す に べ き point が あ り, now も 検 beg in で あ る. (1) の be 験 が designated り into み, (2) の be 験 は technology problem が residual っ た た め, (1) more に を into め, person liver 検 raw material へ の 応 with を め ざ し て, liver tissue を ホ モ ジ ナ イ ズ し た department で の ミ オ シ ン リ ン acidification の line measurement を な っ て い る.

项目成果

石井 元康: "毛細胆管周囲アクチン線維の極性と機能" 肝細胞骨格研究会誌. 2. 41-59 (1992)

Motoyasu Ishii：“胆小管周围肌动蛋白纤维的极性和功能”《肝细胞骨架研究会杂志》2. 41-59 (1992)。

石井 元康: "胆汁排泄と肝細胞骨格の役割ーマイクロフィラメント.ミオシンを中心に" 胆と膵. (1993)

Motoyasu Ishii：“胆汁排泄和肝细胞骨架的作用 - 重点关注微丝和肌球蛋白”胆汁和胰腺（1993）。

石井 元康: "培養肝細胞サポニンモデルにおける毛細胆管収縮とミオシンリン酸化の検討" 肝臓. 33. 130- (1992)

Motoyasu Ishii：“培养肝细胞皂苷模型中胆小管收缩和肌球蛋白磷酸化的检查”肝脏。33. 130-（1992）

石井 元康: "毛細胆管周囲アクチン・ミオシンの機能" 日本消化器病学会雑誌. 89. 1659- (1992)

Motoyasu Ishii：“胆小管周围肌动蛋白和肌球蛋白的功能”日本胃肠病学会杂志 89。1659-（1992）