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The analysis of monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1) receptor

单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)受体的分析

基本信息

批准号：
04670394
负责人：
TANI Kenji
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年来、バキュロウイルス発現系を用いたリコンビナント蛋白産生系で、hMCP-1の発現実験を行ってきた。その結果、感染細胞上清中に10〜20mug/1と多量にhMCP-1が分泌されていることが判明した。これを基に以下の実験を行った。(1)糖鎖修飾の解析結合型の糖鎖形成を阻害するツニカマイシン下で培養した細胞から発現するhMCP-1の分子量は変化は認められない。ゴルジ体機能を阻害するモネンシン従つてで培養した細胞から発現するhMCP-1は一11kDのmajorbandのみである。以上の結果から、hMCP-1の分子量の多様性は、11kDのコア蛋白に対する。結合型の糖鎖修飾によるものと考えられた。更にシアリル酸エキソグリナーゼであるイノラミニダーゼ及びマンノースエキソグリカナーゼであるマンノシダーゼによりhMCP-1の分子量に変化は認められず、Galbeta1-3Gal NAcO結合部位のエンドグリカナーゼであるO-グリカナーゼにより11.5kDのminor bandが消失することから、hMCP-1のomicron結合型の糖鎖修飾はGalbeta1-3Gal NAcであるが、シリアル酸の重合が認められない点で異なることが判明した。(2)hMCP-1の精製及びN末端解析培養液を直接CM-Sephadenイオン交換カラムで溶出し、その溶出液をSDS-PAGEで解析したところ、ほぼ単一な11kDのバンドが得られた。100mlの培養液より1.4mgのhMCP-1精製蛋白が得られ、この精製蛋白のN端アミノ酸解析より、cDNAより推測されるhMCP-1のN端側29塩基が欠如していた。hMCP-1は、その分泌の際にN端側23塩基がシグナルペプチドとして切除されると報告されているが、本発現系ではさらに6塩基が切除されており、本解析におけるhMCP-1の低活性は、そのN端側の違いによるものである可能性が示唆された。

In the past year, the development of hMCP-1 has been successfully carried out in the production of hMCP-1 protein. As a result, 10 ~ 20 ug/1 of hMCP-1 was secreted in the supernatant of infected cells. The following is a summary of the results. (1)The molecular weight of hMCP-1 changes and is recognized when cells are cultured in the presence of sugar lock modifications that prevent the formation of analytically bound sugar locks. hMCP-1 is an 11kD majorband that can inhibit cell growth in culture. These results indicate that hMCP-1 molecular weight diversity and 11kD protein correlation. The combination of sugar chain modification In addition, the molecular weight of hMCP-1 is reduced to 11.5kD and the molecular weight of hMCP-1 is reduced to 11.5kD. The difference between the two is not obvious. (2)hMCP-1 purification and N-terminal analysis of the culture solution directly CM-Sephaden exchange system dissolution, SDS-PAGE solution analysis, separation, separation and purification of a single 11kD. The purified hMCP-1 protein was obtained from 100ml of culture medium, and the N-terminal amino acid analysis and cDNA analysis of the purified hMCP-1 protein were performed. hMCP-1 is secreted at the N-terminal 23-mer level and reported to be secreted at the N-terminal 23-mer level. This finding indicates that hMCP-1 has low activity at the N-terminal 23-mer level and the N-terminal 23-mer level may be secreted at the N-terminal 23-mer level.