細胞刺激に伴うポリコルチンの分子架橋反応とアクチンの組織化との関連性の研究

细胞刺激后多皮质素分子交联反应与肌动蛋白组织关系的研究

• 批准号: 04680179
• 负责人: 神奈木 玲児
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680179/
• 关键词: リポコルチン; 扁平上皮癌; 架橋反応; アクチン; 細胞骨格蛋白質; 酵素免疫測定

リポコルチンはもともと、リン脂質結合蛋白としても知られるが、一方、カルパクチンの別名のあるとおり、カルシウム依存性のアクチン結合蛋白質としての生理的意義をも有している。リポコルチン分子のリン脂質結合領域と、アクチン結合領域は共通ドメインであり、単分子のままではいずれか片方とのみ結合し得る。しかし架橋リポコルチンはこの両者と結合でき、細胞骨格蛋白質と細胞リン脂質膜とを繋ぎあわせることができる。我々は最近、EGFによる刺激にともない、ヒト扁平上皮癌細胞A431の細胞内リポコルチンIが活発な架橋反応をうけることを発見し、また、リポコルチンIのリン脂質への結合の際のカルシウム感受性が、架橋されることによって著しく高められることを見出した。今年度は、この研究を引き継ぎ、リポコルチンIをヒト胎盤よりDEAEカラムクロマトグラフィーおよび我々の考案したリン脂質アフィニティクロマトグラフィーにて精製し、これをトランスグルタミナーゼによって架橋した。架橋リポコルチンのアクチンとの結合活性を、ウサギF-アクチンを用いた沈降実験によって調べたところ、有意の結合活性を検出できた。一方、リポコルチンIに特異的な抗体を作成して、EGFによる刺激をうけたヒト扁平上皮癌細胞A431の細胞内架橋リポコルチンIの存在様式とアクチンをはじめとする細胞骨格蛋白質との結合様式を蛍光顕微鏡で観察した。架橋リポコルチンIはEGFによる刺激をうけたヒト扁平上皮癌細胞A431では細胞膜に斑状に局在しており、細胞骨格蛋白質との結合が示唆された。また、この抗体を用いて、血清中の微量のリポコルチンの酵素免疫測定を試みた。ヒト血清中にも架橋リポコルチンIと考えられる分子が存在している事が判明した。

リ ポ コ ル チ ン は も と も と, リ ン lipid binding protein と し て も know ら れ る が, one party, カ ル パ ク チ ン の alias の あ る と お り, カ ル シ ウ ム dependency の ア ク チ ン binding protein と し て の physiological significance を も have し て い る. リ ポ コ ル チ ン molecular の リ ン lipid と combining field, ア ク チ ン combining domain common は ド メ イ ン で あ り, 単 molecular の ま ま で は い ず れ か piece side と の み combining し る. し か し bridging リ ポ コ ル チ ン は こ の struck the と combining で き, cells bone protein と リ ン lipid membrane と を 繋 ぎ あ わ せ る こ と が で き る. I 々 は recently, EGF に よ る stimulus に と も な い, ヒ ト squamous cell cancer A431 の intracellular リ ポ コ ル チ ン I live が 発 な bridging the 応 を う け る こ と を 発 し, ま た, リ ポ コ ル チ ン I の リ ン lipid へ の combining の interstate の カ ル シ ウ ム susceptibility が, bridging さ れ る こ と に よ っ て in し く high め ら れ る こ と を see し Youdaoplaceholder0. Our は, こ の research を lead き 継 ぎ, リ ポ コ ル チ ン I を ヒ ト placenta よ り DEAE カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー お よ び I 々 の test case し た リ ン lipid ア フ ィ ニ テ ィ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に て refined し, こ れ を ト ラ ン ス グ ル タ ミ ナ ー ゼ に よ っ て bridging し た. Bridging リ ポ コ ル チ ン の ア ク チ ン と の combined with active を, ウ サ ギ F - ア ク チ ン を with い た sink be 験 に よ っ て adjustable べ た と こ ろ, intentionally の combined with active を 検 out で き た. Side, リ ポ コ ル チ ン に specific antibody を な I made し て, EGF に よ る stimulus を う け た ヒ ト squamous cell cancer A431 の intracellular bridging リ ポ コ ル チ ン の existence others in type I と ア ク チ ン を は じ め と す る cells bone protein と の combined with others in type を 蛍 light 顕 micromirror で 観 examine し た. Bridging リ ポ コ ル チ ン I は EGF に よ る stimulus を う け た ヒ ト squamous cell cancer A431 で は membrane に porphyritic に bureau in し て お り cells, bone protein と の combining が in stopping さ れ た. Youdaoplaceholder0 and <s:1> <s:1> antibody を are determined by <s:1> て and <s:1> trace <s:1> リポコ チ チ チ <s:1> enzyme immunoassay in serum を test みた. ヒ ト serum に も bridging リ ポ コ ル チ ン と exam I え ら れ が る molecules exist し て い る matter が.at し た.

项目成果

Uemura,K,他: "Identification of immuno-reactive lipocortin 1-like molecules in serum and plasma by an enzyme immunoassay for lipocortin 1." Biochim.Biophys.Acta. 1119. 250-255 (1992)

Uemura, K, 等人：“通过酶免疫测定法鉴定血清和血浆中的免疫反应性脂皮质素 1 样分子。Biochim.Biophys.Acta。” 1119. 250-255 (1992)

神奈木 玲児: "「自己免疫性溶血性貧血ーとくに寒冷凝集素症の発症機序について」" 血液・腫瘍科. 24. 100-112 (1992)

Reiji Kanaki：“‘自身免疫性溶血性贫血 - 特别是冷凝集素病的发病机制’”血液学和肿瘤学系 24. 100-112 (1992)。

Tuo,X-H,他: "Stage-specific expression of cancer-associated type 1 and type 2 chain polylactosamine antigens in the developing pancreas of human embryos." Cancer Res.52. 5744-5751 (1992)

Tuo, X-H 等人：“人类胚胎发育中胰腺中癌症相关 1 型和 2 型链聚乳糖胺抗原的阶段特异性表达”，Cancer Res。

Takada,A,他: "Contribution of carbohydrate antigens sialyl Lewis A and sialyl Lewis Xto adhesion of human cancer cells to vascular endothelium." Cancer Res.53. 354-361 (1993)

Takada, A, et al.：“碳水化合物抗原唾液酸路易斯 A 和唾液酸路易斯 X 对人类癌细胞粘附到血管内皮的贡献。”Cancer Res.53 (1993)。

Ohmori,K.,他: "Differentiation-dependent expression of sialyl SSEA-1 and I-antigens on human lymphoid cellsand its implications for carbohydrate-mediated adhesion to vascular endothelium." Blood. 81(1). 101-111 (1993)

Ohmori, K. 等人：“人淋巴细胞上唾液酸 SSEA-1 和 I-抗原的分化依赖性表达及其对碳水化合物介导的血管内皮粘附的影响 81(1)。” (1993)