肝細胞増殖因子(HGF)受容体の多様性と細菌内情報伝達機構

肝细胞生长因子（HGF）受体的多样性和细菌内信号转导机制

• 批准号: 05808067
• 负责人: 新垣 尚捷
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05808067/
• 关键词: 肝細胞増殖因子; 増殖因子受容体; 細胞内情報伝達機構; 初代培養肝細胞

本研究では、肝細胞増殖因子(hepatocyte growth factor;HGF)の多様な生物活性の発現調節機構を理解するための第一歩として、1)HGFの細胞内情報伝達機構の解析、2)HGF受容体の解析を行い、以下の結果を得た。1.HGFのmitogenとしての活性は、チロシンキナーゼにより正のC-キナーゼにより負の調節を受けることが示唆されていたが、本研究では、TPA(12-o-tetradecanoylphorbol 13-acetate)を用いて、負の調節機構をさらに詳しく解析し、1)低濃度(<10ng/ml)のTPAは、HGF作用に対し何ら影響を与えないが、高濃度(100ng/ml)のTPAは、HGFの作用を増強する(約1.6倍)こと、2)初代培養肝細胞を、高濃度(100ng/ml)のTPAで前処理し、細胞内のC-キナーゼを枯渇した後にHGFを作用させると、HGFのmitogenとしての活性は約2.6倍にまで増強すること、3)C-キナーゼを枯渇させた条件では、H-7(C-キナーゼ阻害剤)によるHGF作用の増強効果はみられないことを明らかにし、HGF作用に対するC-キナーゼの役割を確認することが出来た。2.初代培養肝細胞や、HGFにより増殖抑制を受けるMethA細胞には分子量を異にする2種類のHGF受容体が存在することが明らかになっていた。本研究では、HGFにより細胞運動が亢進するMDCK細胞、HGFにより増殖抑制を受けるsarcoma180細胞をHGF受容体の解析を行ったが、HGF受容体の多様性はみられなかった。設備備品として購入したアルミブロック恒温槽は、SDS-PAGEの際のsampleの前処理、in vitroでの酵素活性の測定に頻繁に使用しており、本研究の遂行に十分な役割を果たしている。最近、初代培養肝細胞には、HGF受容体に特異的なチロシンホスファターゼの存在を示唆する結果を得ており、今後、HGF作用の負の調節因子に的を絞り、HGFの細胞内情報伝達機構を解析する予定である。

This study is the first step to understand the mechanisms regulating the expression of multiple biological activities of hepatocyte growth factor (HGF). 1) Analysis of intracellular signaling mechanisms of HGF. 2) Analysis of HGF receptors. 1. HGF mitogen activity is regulated by positive and negative regulation. This study was conducted on TPA.(12-o-tetradecanoylphorbol 13-acetate) is used in medium and negative regulatory mechanisms.(<10ng/ml) TPA and HGF are the main factors affecting the growth of HGF.(100ng/ml) The effect of TPA and HGF was enhanced.(about 1.6 times), 2) Primary cultured hepatocytes, high concentration (100ng/ml) of TPA can act on HGF after the intracellular C-, and the mitogen activity of HGF increases by approximately 2.6 times., 3) The conditions for C-, H-7 The effect of HGF on the enhancement of the C-phase is confirmed. 2. In primary cultured hepatocytes, HGF is inhibited by growth inhibition. MethA cells have different molecular weights. Two kinds of HGF receptors exist. In this study, HGF was detected in MDCK cells, HGF was detected in sarcoma180 cells, and HGF receptor was detected in various cells. The preparation of samples for SDS-PAGE and the determination of enzyme activity in vitro were frequently used. Recently, the expression of HGF receptor-specific proteins in primary cultured hepatocytes has been investigated. In the future, the expression of HGF as a negative regulator has been determined.