正常8番染色体移入細胞を用いた大腸癌の進展に関与する癌抑制遺伝子の検索

使用引入正常 8 号染色体的细胞寻找参与结直肠癌进展的肿瘤抑制基因

• 批准号: 06670247
• 负责人: 田中 貴代子
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670247/
• 关键词: 癌抑制遺伝子; 8番染色体; 微小核融合法; 染色体移入; 大腸癌; 癌形質抑制; サブトラクション

大腸癌の発生、進展には複数の遺伝子変化が起こっていることが明らかになってきているが、転移、浸潤に関与する遺伝子変化については現在のところまだよく判っていない。我々は、転移性を示す進行大腸癌で8番染色体短腕の欠失を高頻度に認めており、8番染色体上に大腸癌の進展に関与する癌抑制遺伝子の存在が予想された。そこで8番染色体短腕に欠失のある大腸癌細胞に正常8番染色体を移入したところ、8番染色体短腕が移入された細胞では癌形質が抑制され、再構成基底膜を用いた浸潤能も低下していた。また、移入細胞から8番染色体短腕特定領域が脱落し、癌形質が再発現したリバータントが得られた。そこで、大腸癌の進展に関与する遺伝子を検索するために、8番染色体移入細胞とそのリバータント細胞から全RNAを調整し、さらにオリゴ(dT)セルロースカラムによりポリA付加mRNAを調整した。リバータンント細胞から調整したmRNAをoligotex-dT30にアニールし、(dT)_<30>をプライマー、mRNAを鋳型として逆転写酵素によりcDNAを合成した。熱変性後遠心により上清画分のmRNAを除き沈殿画分のcDNA-oligotex-dT30に正常8番染色体移入細胞から調整したmRNAを加えハイブリッドを形成させ、遠心により共通のmRNAを除いた。この繰り返しにより濃縮した8番染色体移入細胞に特異的なmRNAを鋳型として、2本鎖cDNAを合成し、BluescriptIIのクローニング部位に挿入し、大腸菌にトランスフェクトしてライブラリーを作製した。現在、移入細胞とリバータント細胞のcDNAをプローブにしてデファレンシャルハイブリダイゼーションを行い8番染色体移入細胞に特異的な遺伝子のクローンの選択を行っている。

In the case of cancer, the number of people who are in the process of developing cancer is very important. Do not know how to treat cancer, transfer, immersion, and chemotherapy. Now, you have to know how to make a decision. The results of our study and transfer test showed that the chromosome short wrist loss of 8 times of cancer, the high degree of progression of cancer and the presence of cancer suppressor gene on chromosome 8. The normal chromosome of the cancer cell was transferred into the cell, the chromosome was transferred into the cell, the cancer was suppressed, and then the basement membrane was immersed into the basement membrane. After 8 times of chromosome shortening, the specific field "shedding", and the cancer shape showed that there was no significant difference between the two groups. The progression of cancer and the development of large cancers are related to the number of chromosomes that have been transferred to the cells for 8 times. The chromosomes have been transferred into the cells for 8 times, and the chromosomes have been transferred into the whole RNA cell. (dT) the whole number of chromosomes has been transferred to the whole cell. MRNA, oligotex-dT30, lt;30>, (dT) _ & lt;30>, mRNA, reverse enzyme, cDNA synthesis. After sex, the upper clear picture of the heart is divided into mRNA, except that the normal chromosome of the Shen Dian painting is transferred into the cell, the normal chromosome is transferred into the cell, the mRNA is added, the heart is formed, the heart is common, the mRNA is removed. The chromosomes have been transferred into mRNA cells, two copies of cDNA synthesis, the location of BluescriptII cells, and the number of chromosomes that have been transferred into cells. Now, move into the cell

项目成果

M.Miyaki: "Familial polyposis:recent advances" Critical reviews in Oncology/Hematology. 19. 1-31 (1995)

M.Miyaki：“家族性息肉病：最新进展”肿瘤学/血液学批判性评论。

M.Miyaki: "Characteristics of somatic mutation of the adenomatous polyposis coli gene in colorectal tumors" Cancer Research. 54. 3011-3020 (1995)

M.Miyaki：“结直肠肿瘤中腺瘤性息肉病大肠杆菌基因的体细胞突变特征”癌症研究。