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精巣腫瘍における生殖幹細胞発現遺伝子ＤＤＸ１の個体での機能解析

生殖干细胞表达基因DDX1在个体睾丸癌中的功能分析

基本信息

批准号：
23592356
负责人：
田中貴代子
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23592356/
关键词：
DDX1 精巣腫瘍トランスジェニックノックアウト免疫組織染色

项目摘要

CAGプロモータ下流にloxP- Neomycin-loxP配列、Ddx1遺伝子を挿入したコンストラクトをマイクロインジェクションし、2種のトランスジェニックマウスの系統を樹立した。作出した２系統のトランスジェニックマウスと精巣特異的にCreを発現するNurogenin3-Creトランスジェニックマウスと交配した。CreリコンビナーゼによりNeomycin が除去され，CAGプロモーター下流にDdx1が挿入された個体について4 -12ヶ月の精巣を摘出し、トランスジェニックマウスとコントロールの精巣重量を比較したが，２系統共に特に目立った差は認められなかった。定量的PCRを用いた生後4-12ヶ月の精巣のDdx1の発現量はコントロールに比べ約２倍に亢進していた。そこで、摘出した精巣を固定、包埋後パラフィン切片を作成し、免疫組織染色によりDdx1の発現、分布を調べた。トランスジェニックマウス精巣では、GATA1を発現するセルトリ細胞は精細管周辺部に分布し、異常はみられなかったが、Ddx1発現細胞は精細管周辺部だけにとどまらず内腔方向に異常増殖している精細管も存在した。しかし、精子形成過程における大きな異常は検出できなかった。そこで，発生初期に全身でCre を発現する CAG-Creマウスとの交配により、CAG-Cre―Ddx1個体を得た。今後、発生段階を追って解析することにより精子形成過程への影響を調べる予定である。また、ノックアウトマウスについては、新たに生殖系列に伝播したキメラマウスを作出した。現在、Floxマウスまで作成が進んでいる。ホモ接合型のマウスが出来次第、精子形成過程における野生型との違いについて、精巣切片を作製して繊細に解析することと，RNA及びタンパクレベルでの発現を調べる予定である。

CAG downriver loxP- Neomycin-loxP alignment, Ddx1 gene transfer into the system, two kinds of system to establish Make Nurogenin3-Cre Special Cre Special Cre Special Cre Quantitative PCR was used to detect Ddx1 in 4-12 months after birth, which was about 2-fold higher than that in the control group. After extraction, the sperm was fixed and embedded, and the sections were prepared. Immunohistochemical staining was used to detect Ddx1 and adjust its distribution. Ddx1 is found in cells that are distributed along the periphery of the fine tubule, abnormal in the direction of the lumen, and abnormal in the direction of the fine tubule. There are many abnormalities in the process of sperm formation. In the early stage of life, CAG-Cre-Ddx1 individuals were found in the whole body. In the future, the development stage will be analyzed, and the influence of sperm formation process will be adjusted.また、ノックアウトマウスについては、新たに生殖系列に伝播したキメラマウスを作出した。Now, Flox. The sequence of zygote formation, the wild type of sperm formation, the fine analysis of sperm sections, the regulation of RNA and sperm formation, etc.