权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

正常1番染色体移入細胞を用いた大腸癌抑制遺伝子の検索

使用正常 1 号染色体转移细胞寻找结直肠癌抑制基因

基本信息

批准号：
05670214
负责人：
田中貴代子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05670214/
关键词：
癌抑制遺伝子サブトラクション大腸癌 1番染色体微小核融合法

项目摘要

正常1番染色体短腕34-36領域の移入によりヌードマウスにおける造腫瘍性が抑制された移入細胞と、移入領域の一部の欠失により造腫瘍性が再発現したリバータント細胞からグアニジウムチオシアネート法により全RNAを調整し、さらにオリゴ(dT)セルロースカラムによりポリA付加mRNAを調整した。リバータント細胞から調整したmRNAをologotex-dT30にアニールし、(dT)_<30>をプライマー、mRNAを鋳型としてAMV逆転写酵素によりologotex-dT30上でcDNAを合成した。熱変性後遠心により上清画分のmRNAを除き沈殿画分のcDNA-oligotex-dT30に正常1番染色体移入細胞から調整したmRNAを加えハイブリッドを形成させ、遠心によりcDNA-oligotex-dT30とハイブリッドを形成した共通のmRNAを除いた。この繰り返しにより濃縮した1番染色体移入細胞特異的mRNAを鋳型として、XbaIプライマー-アダプターを用いて1本鎖cDNAを合成し、大腸菌RNaseHとDNAポリメラーゼIにより2本鎖cDNAを合成した。SalIアダプターを付加した後XbaIで消化してBluescriptIIのクローニング部位に挿入し、大腸菌にトランスフェクトしてライブラリーを作製した。現在移入細胞とリバータントのcDNAをプローブにしてデファレンシャルハイブリダイゼーションを行い1番染色体移入細胞に特異的な遺伝子クローンの選別を行っている。

In normal chromosome 1, the gene expression in the region 34-36 was inhibited by the gene expression in the transplanted cells, and the gene expression in part of the transplanted region was inhibited by the gene expression in the transplanted cells. The expression of mRNA is regulated by the enzyme ologotex-dT <30>30 and cDNA is synthesized by the enzyme AMV. After the heat transfer, the mRNA of the supernatant was removed from the cDNA library, and the cDNA library was removed from the cDNA library. The gene expression of 1-part chromosome is transformed into cell-specific mRNA. The gene expression of 1-part cDNA is synthesized. The gene expression of 2-part DNA is synthesized by E. coli RNase H. Saline is the most important part of the diet. It is the most important part of the diet. Now the cDNA of the transferred cell is selected from the chromosome of the transferred cell.