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前破骨細胞の精製

前破骨细胞的纯化

基本信息

批准号：
06671869
负责人：
小玉博明
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Ohu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671869/
关键词：
前破骨細胞破骨細胞間質細胞マクロファージ Mac-2 F4 80

项目摘要

間質細胞株PA6とマウス骨髄細胞を10^<-8>M副甲状腺ホルモンの存在下で7日間共培養したところ、酒石酸耐性酸性フォスファターゼ陽性で単核の細胞が多数出現したが、多核の破骨細胞はほとんど出現せず、ほとんどの細胞は前破骨細胞の段階に留まっていると考えられた。これらの細胞のほとんどはMac-2陽性で、約50%がMac-1陽性であったが、F4/80,MOMA-2,およびBM8は陰性であった。この結果は我々がin vivoの研究によって得られたものと一致し、前破骨細胞がマクロファージから分化するという考えを否定すると考えられる。この共培養系ではマクロファージも多数出現するために、前破骨細胞を精製するためには、まずPA6細胞とマクロファージを除去する必要があった。そこで、コラゲナーゼ処理によって細胞を分散し、プラスティックデイシュへの接着性による分離を試みたが、前破骨細胞も壁着性であるために不可能であった。そこで、コラゲナーゼで分散した細胞をFITCでラベルしたMac-2抗体とphycoerythrinでラベルしたF4/80抗体で染色し、FACSを用いてMac-2陽性、F4/80陰性の分画の細胞を分離した。得られた細胞のほとんどは酒石酸耐性酸性フォスファターゼ陽性で、前破骨細胞をほぼ純粋に精製出来たと考えられる。Mac-2陽性、F4/80陰性の分画の細胞を100個ずつPA6細胞と共培養したところ、24時間後には約半数の細胞が融合して多核になり、破骨細胞が形成された。この際、副甲状腺ホルモンや活性型ビタミンD_3等のホルモン類は必要ではなく、むしろ阻害的であった。

Interstitial cell line PA6: Osteoclast cells: 10^<-8>M parathyroid cells: 7 days co-culture, tartaric acid-tolerant cells: positive cells: most of the cells appeared, multinucleated osteoclasts: 10 ^M parathyroid cells: 7 days co-culture, tartaric acid-tolerant cells: 3 days co-culture, multinucleated osteoclasts: 7 days co-culture, multinucleated osteoclasts: 8 days co-culture, multinucleated osteoclasts: 9 days co-culture, multinucleated osteoclastsこれらの细胞のほとんどはMac-2阳性で、约50%がMac-1阳性であったが、F4/80,MOMA-2,およびBM8は阴性であった。The results of this study are consistent with those of pre-osteoclast differentiation. The majority of these co-culture lines were found to be pre-osteoclasts. It is impossible to separate the osteoclast from the osteoclast. F4/80 antibody staining, FACS, Mac-2 positive, F4/80 negative, and cell separation. The cells were purified from the acid. Mac-2 positive and F4/80 negative cells were co-cultured with 100 PA6 cells. After 24 hours, about half of the cells fused and osteoclasts formed. In this case, the parathyroid gland and the active thyroid gland D_3 are necessary for the prevention of thyroid cancer.