突然変異マウスを利用した破骨細胞の分化機構の解析

利用突变小鼠分析破骨细胞分化机制

• 批准号: 01571026
• 负责人: 小玉 博明
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Ohu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571026/
• 关键词: 破骨細胞; 突然変異マウス; 造血因子; 間質細胞; 骨吸収促進因子; コロニ-

初めに、破骨細胞の分化の研究のためのコロニ-形成法を確立した。破骨細胞の分化支持機構には、造血因子と骨または骨髄の間質細胞の2種類があり、さらにCa調節ホルモン等の骨吸収促進因子が必要である。造血因子を用いた培養系では、造血因子を含むコラ-ゲン培地にマウス骨髄細胞を懸濁して植え込み、コラ-ゲンをゲル化させた後に培養し、翌日1_0,25(OH)_2D_3を添加し、コロニ-を形成させた。間質細胞としては、細胞間接触によって造血幹細胞の増殖を支持する能力を持つMC3T3-G2/PA6(PA6)細胞を用いた。PA6細胞を培養した35-mm dishを用意して、氷上に置き、骨髄細胞を1_0,25(OH)_2D_3を含むコラ-ゲン培地に懸濁して、PA6細胞の上に注ぎ込み、30分間放置して骨髄細胞が沈んでPA6細胞に接触するようにした。その後、室温に移してコラ-ゲンをゲル化させてから培養し、コロニ-を形成させた。破骨細胞の同定は酒石酸耐性酸性フォスファタ-ゼ(TRACP)の染色によって行なった。TRACP陽性細胞のみからなる小さなコロニ-、TRACP陽性細胞と陰性細胞の両方を含むコロニ-、およびTRACP陰性細胞のみからなるコロニ-が形成された。TRACP陰性細胞のほとんどはマクスファ-ジであった。opマウスには破骨細胞がほとんど無いが、血球系細胞以外の細胞に欠陥があると言われているので、PA6細胞の代わりにopマウスの間質細胞を用いる実験を試みた。しかし、脾臓からも頭蓋冠からも十分な数の細胞を得ることが出来なかったので、現在細胞株を樹立しており、それとPA6細胞を比較する予定である。ocマウスでは血球系細胞に欠陥があり、小さな破骨細胞が多数見られる。そこで、ocマウスの脾臓細胞をPA6細胞と共培養したが、in vivoで見られるような正常マウスとの明確な差は見られなかった。現在、正常とoc由来の破骨細胞で骨吸収能に差が見られるか検討中である。opマウス由来の細胞株とocマウス脾臓細胞との共培養も試みたい。

A study on differentiation of primary and osteoclast cells was carried out. Bone resorption promoting factors such as hematopoietic factors and bone resorption promoting factors are necessary for osteoclast differentiation supporting mechanisms. Hematopoietic factors are used in culture systems. Hematopoietic factors are used in culture systems. Hematopoietic factors are used in culture systems. Hematopoietic cells are cultured in suspension. Hematopoietic factors are used in culture systems. Hematopoietic factors are used in culture systems. The ability of stromal cells to support the proliferation of hematopoietic stem cells through cell-to-cell contact is maintained in MC3T3-G2/PA6 (PA6) cells. PA6 cells were cultured on a 35-mm dish and incubated at 30-minute intervals. Bone marrow cells were incubated at 1_0, 25 (OH)_2D_3 and suspended in culture medium. PA6 cells were incubated at 30-minute intervals. After the temperature change, the temperature change will occur. Osteoclasts are resistant to tartaric acid. TRACP positive cells and TRACP negative cells were formed by the following methods: TRACP female cells Op it's osteoclast. Op it's mesenchymal. Op it's hematopoietic. The number of cells obtained from this study was 10. The number of cells obtained from this study was 10. The number of cells obtained from this study was 10. The number of cells obtained from this study was 10. The number of PA6 cells obtained from this study was 10. The majority of osteoclasts were found in the blood cells. PA6 cells were co-cultured in vivo and were found to be normal. Now, the origin of normal osteoclasts is bone absorption energy. Op! Op! Op!