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間質細胞株との共培養系における造血幹細胞の増殖動態の解析

造血干细胞与基质细胞系共培养系统中的增殖动态分析

基本信息

批准号：
03252211
负责人：
小玉博明
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Ohu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03252211/
关键词：
間質細胞造血幹細胞 cーkit cーkit ligand 共培養増殖

项目摘要

間質細胞株PA6は、長期に渡る造血を支持する能力を持っている。この細胞とC57BL/6マウスの骨髄細胞の共培養系で6週間造血を持続出来るような造血幹細胞の数を限界希釈法で求めると、骨髄細胞5.3x10^4個に1個に割合であった。骨髄細胞を2.5x10^4個植え込んだ群では、19枚のdishの内の7枚で造血が持続していた。これらのdishから血球系細胞を個々に採取し、7匹のWBB6F1ーW/W^vマウスに静注した。移植後24週後に、3匹のマウスでC57BL/6マウス由来の幹細胞による赤血球造血が観察された。このことは、PA6細胞が末分化な造血幹細胞の増殖を支持出来ることを示す。ほとんどすべての血球系前駆細胞がcーkit分子を発現していることが最近明らかになった。このreceptor分子に対するmonoclonal抗体をPA6細胞と骨髄細胞の共培養系に添加すると、ほどんどのCFUーSが消失して造血が低下したが、抗体を除いて培養を続けると造血の回復が観察された。抗cーkit抗体の処理でどのような造血幹細胞が生き残るかということを調べるために、共培養系をcollagen gelで覆って、幹細胞のcolonyを形成させる方法を開発し、個々のcolonyの出現と消失を追跡した。その結果、4日間の抗体処理後約5%の幹細胞が生き残り、それらは高い増殖能を持つものであった。さらに、PA6細胞株から短期造血しか支持出来なくなった3つのsubcloneを分離したが、これらの細胞はcーkit ligandを発現していた。これらの結果から、cーkit分子は末分化な幹細胞でも発現されていることが最近明らかになったが、このreceptor分子を介したsignalは未分化な造血幹細胞の生存と増殖には必須ではなく、未知の機構が存在することが強く示唆された。

The mesenchymal cell line PA6 maintains the ability to support hematopoiesis in the long term. C57BL/6 cells were used as co-culture system for bone marrow cells. Hematopoietic cells were maintained at 6 weeks. The number of hematopoietic stem cells was determined by the method of limiting the number of bone marrow cells to 5.3x10^4 cells and 1 cell. Bone marrow cells 2.5x10^4 cells divided into groups, 19 cells divided into 7 cells divided into groups. The dish was prepared by intravenous injection of 7 pieces of WBB6F1 W/W. 24 weeks after transplantation, 3 mice were killed and C57BL/6 cells were killed. This is the first time that PA6 cells have been able to differentiate into hematopoietic stem cells. The first cell of the blood cell line is called a c-kit. Monoclonal antibodies to PA6 cells were added to the culture system, and CFU S disappeared. Hematopoiesis was reduced. Anti-c-kit antibody treatment of hematopoietic stem cells from generation to death, co-culture system to collagen gel, stem cell colony formation, methods to develop, individual colony appearance and disappearance of trace. About 5% of the stem cells after 4 days of antibody treatment are still alive, and the growth rate is still high. The PA6 cell line was isolated from the short-term hematopoiesis support, and the cell kit was developed. The result is that the undifferentiated hematopoietic stem cells are developed in the presence of a receptor molecule, which is a strong signal for the survival and proliferation of undifferentiated hematopoietic stem cells.