歯周病関連菌由来の免疫抑制因子に対する免疫担当細胞受容体の分子生物学的研究

牙周病相关细菌免疫抑制因子免疫活性细胞受体的分子生物学研究

• 批准号: 06671894
• 负责人: 斉藤 重野
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671894/
• 关键词: 歯周病; 歯周病関連菌; 免疫抑制因子

歯周病関連菌由来の免疫抑制因子に対する宿主免疫担当細胞側の受容体をin vitroで検索するに先がけてCampylobactor rectus、Prevotella loescheii、Porphyromonas gingivalisの可溶分画から免疫抑制因子の精製をHPLC-DEAEイオン交換クロマトグラフィー法およびゲルろ過法にて手がけた。宿主免疫担当細胞としてヒトリンパ球由来の培養株細胞を用い、この細胞への^3H-チミジン取り込み能の抑制を指標として溶出分画の免疫抑制活性を求めた。溶出分画はヒトのB細胞由来株細胞(BALL-1)、T細胞由来株細胞(Jurkat)および単球由来株細胞(U937)の^3H-チミジン取り込み能を供与量依存的に抑制した。ホルボールエステルにてマクロファージに分化させたU937にこのタンパク質を作用させると、この細胞からの培養液へのインターロイキン-1の分泌が抑制された。さらに、Jurkat細胞からのインターロイキン-2の分泌も抑制を受けた。ついで、免疫抑制因子を作用させた免疫担当細胞からmRNAを調整し、cDNAを合成することを試みた。しかし、cDNAライブラリーのスクリーニングを行うにあたり、精製標品の純度が問題になってきた。すなわち、因子タンパク質を精製する過程で細菌培養用培地中に含有するタンパク質成分と因子タンパク質との凝集を生じているとの疑問を持つようになった。したがって、精製タンパク質からアミノ酸配列を決定し、当初の計画のごとく、アミノ酸配列から対応するオリゴヌクレオチドプローブを作製することは困難となった。そこで、Actinobacillus actinomycetemcomitansのLeukotoxin遺伝子の塩基配列からオリゴヌクレオチドプローブをPCR法にて作製し、このプローブを用いてλgt10ファージライブラリーをスクリーニングする方法に転じ、検討中である。

Immunosuppressive factors derived from peripheral disease-related bacteria were detected in vitro by soluble fractionation of Campylobactor rectus, Prevotella loescheii, Porphyromonas gingivalis, and purification of immunosuppressive factors by HPLC-DEAE exchange. To determine the immunosuppressive activity of host immune responsible cells and their 3H-binding activity in vitro. Dissolution analysis of B cell-derived cells (BALL-1), T cell-derived cells (Jurkat), and single cell-derived cells (U937) was performed in a dose-dependent manner. U937, the cell culture medium, and the secretion of protein-1 are inhibited. Jurkat cells are inhibited by the secretion of protein-2. Immunosuppressive factors play an important role in the regulation of mRNA and cDNA synthesis in immune-responsible cells The purity of the purified standard is a problem. The culture medium for bacterial culture contains the essential components, factors, and aggregates in the process of purification. The quality of the product is very high. The quality of the product is very high. The quality of the product is very high. In this paper, Actinobacillus actinomycetemcomitans Leukotoxin gene gene base alignment from the right side of the PCR method for the preparation of the right side, the right side of the PCR method for the use of the right side of the λgt10 right side of the right side of the method, the right side of the discussion.