肝ミクロゾームメタルプロテアーゼの特異的インヒビターの精製と構造解析

肝微粒体金属蛋白酶特异性抑制剂的纯化及结构分析

• 批准号: 06680588
• 负责人: 川畑 俊一郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680588/
• 关键词: プロセシングプロテアーゼ; ジンクペプチダーゼ; エンドペプチダーゼ-24.15

ウサギ肝臓約1kgより50μgのMEPが精製できるが、通常、インヒビターは、その標的酵素より量的に多く存在することから、MEPの際に用いた同程度の精製スケールでそのインヒビターも精製可能と考えられた。肝臓の界面活性剤抽出液を精製の出発物質とし、インヒビター活性をMEPの蛍光消光系ペプチド基質、Abz‐ARVRRANS‐Dnaに対する水解活性の阻害で評価しながら、イオン交換樹脂、色素カラム、ゲルろ過などの手法を組み合せて精製を進めた。実験の最中に東工大の広瀬らにより、MEPがsoluble angiotensin‐binding prtoteinと同一であることが報告された。そこで、界面活性剤を用いず、soluble angiotensin‐binding proteinの精製に用いられた疎水性クロマトグラフィーを取り入れてMEPの精製を行ったところ、ウサギ肝臓1kgから200μgのMEPが得られた。また、ホモゲナイズした肝臓の各遠心画分のインヒビター活性を調べたところ、核の画分にMEPの阻害活性が存在することが判明した。しかし、この活性は非常に不安定であった。また、MEPのニワトリ卵抗体により、MEPが脳、肺、肝臓の脈管の表皮の細胞膜に局在していることが判明したため、核に局在すると考えられるインヒビターの役割は現在のところまったく不明である。

ウ サ ギ liver viscera about 1 kg よ り 50 mu g の MEP が refined で き る が, usually, イ ン ヒ ビ タ ー は, そ の target enzyme よ り quantity に す more く る こ と か ら, MEP の interstate に with い た with degree の refined ス ケ ー ル で そ の イ ン ヒ ビ タ ー も refined possible と え ら れ た. Routine liver の interface active tonic extract を refined の と 発 substance し, イ ン ヒ ビ タ ー active を MEP の 蛍 light extinction is ペ プ チ ド matrix and Abz ‐ ARVRRANS ‐ Dna に す seaborne る の resistance against で hydrolytic activity evaluation 価 し な が ら, イ オ ン exchange resin, pigment カ ラ ム, ゲ ル ろ too な ど の gimmick を group み close せ て refined を into め た. The latest experimental report shows に Tokyo Institute of Technology and Hirose らによ, MEPがsoluble angiotensin-binding prtoteinと, and the same である とが とが とが report された. そ こ で, interfacial active tonic を い ず, soluble angiotensin ‐ binding protein の refined に with い ら れ た 疎 water-based ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を take り れ て MEP line の refined を っ た と こ ろ, ウ サ ギ routine liver 1 kg か ら 200 mu g の MEP が must ら れ た. ま た, ホ モ ゲ ナ イ ズ し た routine liver の far painted heart each の イ ン ヒ ビ タ ー activity を adjustment べ た と こ ろ, nuclear の draw points に MEP の resistance against active が exist す る こ と が.at し た. The activity of <s:1>, <s:1>, <s:1> is に very unstable であった. ま た, MEP の ニ ワ ト リ eggs antibody に よ り, MEP が 脳 の is crucial, lung, and liver vascular の の skin cell membrane に bureau in し て い る こ と が.at し た た め, nuclear に bureau in す る と exam え ら れ る イ ン ヒ ビ タ ー cut は の service now の と こ ろ ま っ た く unknown で あ る.

项目成果

Kishan L,Agarwala: "Activation peptide of human factor IX has oligosaccharides O‐glycosidically linked to threonine residues at 159 and 169." Biochemistry. 33. 5167-5171 (1994)

Kishan L, Agarwala：“人因子 IX 的激活肽在 159 和 169 处具有与苏氨酸残基 O 糖苷连接的寡糖。生物化学 33. 5167-5171 (1994)。

Yoshiki Miura: "A limulus intracellular coagulation inhibitor type 2:Purification,characterization,cDNA cloning,and tissue localization." Journal of Biological Chemistry. 270. 558-565 (1995)

Yoshiki Miura：“鲎细胞内凝血抑制剂 2 型：纯化、表征、cDNA 克隆和组织定位。”

Yoshiki Miura: "A limulus intracellular coagulation inhibitor with characteristics of the serpin superfamily,purification,characterization,and cDNA cloning." Journal of Biological Chemistry. 269. 542-547 (1994)

Yoshiki Miura：“一种鲎细胞内凝血抑制剂，具有丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族的特征、纯化、表征和 cDNA 克隆。”

Shun‐ichiro Kawabata: "Structure and function of staphylothrombin." Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 20. 345-350 (1994)

Shun-ichiro Kawabata：“葡萄球菌凝血酶的结构和功能。”血栓形成和止血研讨会 20. 345-350 (1994)