肺器官培養を用いたセンダイウイルスに対するマウスの抗ウイルス免疫の検討

使用肺器官培养检查小鼠对仙台病毒的抗病毒免疫力

• 批准号: 06680835
• 负责人: 岩井 浤
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680835/
• 关键词: マウス; センダイウイルス; 気管培養; 肺; 代替法

マウス肺を6等分しそれぞれを平底96ウエルマイクロプレートのウエルに入れ,センダイウイルス定量の際に用いる培地199を0.1ml加え,センダイウイルスMN株(10^4TCID_<50>/25μl)を10μl接種し,培養液中のウイルス価を経時的に調べたが,その成績は実験毎にばらつき,明瞭な増殖曲線を得ることはできなかった.次にあらかじめ経鼻接種したマウスから採取した肺,あるいは気管カテーテルを用いてウイルスを注入した肺を199培地で培養したが,ウイルスの増殖を明瞭に認めることはできなかった.そこで,培養液をダルベッコの変法イ-グル培地(DME)に代え,6等分した肺を96ウエルプレートのウエルに入れ,ウイルスを接種したところ,一度は明瞭な増殖曲線を得ることができた.しかし,この成績も再現性に乏しかった.培養した肺を組織学的に調べたところ,広範囲にわたり壊死に陥っていることが判明した.すなわち,肺組織片を96ウエルプレートの1ウエルに0.1mlの培養液と共に入れても,組織片は底面に密着して沈み,培養液が肺組織内に浸透しないため,上皮細胞が変性し,壊死に陥るためウイルスが増殖し得る状態で維持されないことが示唆された.そこでウエルの底にプラスチックメッシュを敷き,組織片を底面に密着させないようにして培養を試みたがウイルス増殖は認められなかった.次にプレートを24ウエルのものに代え,カルチャーインサートに肺組織片を置き,1mlの培養液を加え,ウイルスを接種すると,再現性よくウイルス増殖を観察することができた.組織学的にも細胞が比較的良好に維持され,ウイルス抗原も確認することができた.培養液は199よりDMEの方が高いウイルス価を得ることができた.カルチャーインサートを用いないとウイルス増殖は認められなかった.以上の実験から,マウス肺をおよそ6等分した組織をセンダイウイルスが増殖できるようにプレートウエル内で維持するには,24ウエルプレートとカルチャーインサートを用い,1mlのDME中に底面から浮かした状態で培養する必要があることが示された.ここに到達するまでに数々の試行錯誤を重ね多大な時間を要し,当初計画していた抗ウイルス免疫の検討までには到らなかった.しかし,肺組織片で再現性高くウイルスを増殖させる方法が確立されたので,今後この系を用いて抗ウイルス免疫を検討していく.

The medium of MN strain (10^4TCID_ /25μl) was inoculated with 0.1ml of medium of 199, and the medium of MN strain (10^4TCID_<50>/25μl) was inoculated with 10μl of medium of 199. The next step is to take the first step in the process of inoculation, and the second step is to take the second step in the process of inoculation. The culture medium was inoculated into the culture medium, and the growth curve was once clarified. The results of this study are not reproducible. Culture and histology of lung tissue The lung tissue slice was immersed in 0.1 ml of culture medium, and the bottom of the tissue slice was closely adhered to the bottom of the tissue slice. The culture medium penetrated into the lung tissue, and the epithelial cells became active. The proliferation of the epithelial cells was maintained. The bottom of the tissue slice is closely attached to the bottom of the tissue slice. The next step is to add 24 ml of culture medium to the lung tissue slides, and then inoculate them with the medium. Histologically, the cells were well maintained and their antigens were identified. Culture medium is 199 DMEカルチャーインサートを用いないとウイルス増殖は认められなかった. The above is true, but it is true that the bottom of the DME is in a floating state, and the culture is necessary. How long does it take to get there? How long does it take to get there? The method of high reproducibility of lung tissue slices was established and the system was studied in the future.