センダイウイルスによる可逆的不死化卵巣癌細胞株の樹立と性状解析

利用仙台病毒建立可逆永生化卵巢癌细胞系并对其进行表征

• 批准号: 21K16770
• 负责人: 小松 宏彰
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16770/
• 关键词: 卵巣癌; 不死化細胞; センダイウイルス

令和4年度は令和3年度に引き続いて複数の不死化細胞の樹立を試みた。まず、正常卵巣上皮細胞、BRCA-1 mutation/BRCA-2 mutationのある患者から採取した卵巣上皮細胞、卵巣内膜症性嚢胞細胞、卵巣粘液性腺腫細胞および子宮内膜細胞を手術時の患者検体から採取し、不死化遺伝子（Bmi-1、h-TERT、SV40T）を搭載したセンダイウイルスベクター（SeVベクター）を感染させた。初代培養を継代し、非感染細胞との増殖速度を確認した。各細胞株を長期継代（25継代）およびシングルセル化を行うためのcloningを実施した。SeV感染を確認した後に長期継代が実施可能であることを確認し、各細胞株の染色体解析（QH染色およびmFISH）を実施した。また、作成した不死化細胞株から培養上清由来のエクソソームを超遠心法により抽出し、nanosightによる粒子径の計測、ウエスタンブロットによるタンパクの確認を行い、十分量のエクソソームが抽出できることを確認した。また、各細胞の染色体解析（G-bandやmFISH）を実施し、異数性や構造異型の有無を確認した。さらに、各不死化細胞株からtotal RNAを抽出し、次世代シークエンス解析（transcriptome 解析）を行ったところ、複数の特定の遺伝子発現が有意であることがわかった。さらにRT-PCRでこの遺伝子の発現を確認した。各細胞が上皮細胞であることを確認するために、免疫細胞化学染色で細胞の種類を確認した。今回、センダイウイルスを用いて通常増殖しにくい卵巣上皮細胞を不死化することに挑戦し、長期継代が可能となった。また、細胞の性状解析に加えて、網羅的に遺伝子発現解析を行い、発癌に関与する可能性がある遺伝子の候補を発見した。今後は各細胞についてさらに解析を進めていくが、研究開始当初の目標であった卵巣不死化細胞の樹立はすでに成功し、現在論文作成中である。

The order of the year 4 and the decree of the year of the year 3 will lead to the establishment of an experimental system for the non-death of cells. Oocyte epithelial cells, normal oocyte epithelial cells, BRCA-1 mutation/BRCA-2 mutation patients' oocyte epithelial cells, oocyte endometrium epithelial cells, oocyte mucinous glandular epithelial cells and endometrial cells of oocyte mucinous glands were harvested during surgery, and immortalized oocytes (Bmi-1, h-TERT, SV40T) were collected and infected with SeV cells. The colonization rate of primary culture and non-infected oysters was confirmed. Each cell line has been used for a long period of time (25th generation). Each cell line has been used for a long period of time (25th generation). Each cell line has been used for a long period of time (25th generation). Each cell line has been cultured for a long time (25th generation). Each cell line has been used for a long period of time (25th generation). Each cell line has been cultured for a long time (25th generation). Long-term culture after confirmation of SeV infection may be used for a long period of time, and chromosome analysis (QH staining and mFISH) of each cell line may be performed. The origin of the supernatant of the immortalized cell line, the supernatant, the supernatant, the supernatant The chromosomal analysis of each cell (G-band chromosome mFISH) was performed, and the number of chromosomes was confirmed by chromosome analysis. Each immortalized cell line was extracted from total RNA, the next generation was analyzed by transcriptome, and the number of specific clones was analyzed. Please RT-PCR your child to confirm that you have completed the operation. The epithelial cells of each cell were confirmed by immunocytochemical staining and immunocytochemistry. This time, it is common to say that the egg epithelial cells are immortalized, and the long-term generation may be difficult. The analysis of genetic and cellular traits, the analysis of the genes of the network, the analysis of cancer and the possibility of cancer, the risk of cancer and the possibility of cancer. In the future, the analysis of each cell cycle has been conducted, and the study has been completed at the beginning of the study, which was successful in the establishment of the cell cycle.

项目成果

Establishment and characterization of immortalized cell lines from ovary and fallopian tube using Sendai virus

使用仙台病毒建立卵巢和输卵管永生化细胞系并对其进行表征

• 发表时间: 2023
• 作者: Masayo Okawa;Hiroaki Komatsu;Kohei Hikino;Yuki Iida;Mayumi Sawada;Akiko Kudoh;Shinya Sato; Genki Hichiwa;Kanako Kazuki;Yasuhiro Kazuki;Mitsuo Oshimura;Fuminori Taniguchi;Tasuku Harada
• 通讯作者: Tasuku Harada

センダイウイルスによる可逆的不死化卵巣上皮細胞株の確立

仙台病毒可逆永生化卵巢上皮细胞系的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: 小松宏彰;大川雅世;飛知和弦輝;曳野耕平;飯田祐基;細川雅代;澤田真由美; 工藤明子;千酌潤;香月加奈子;香月康宏;佐藤慎也;谷口文紀
• 通讯作者: 谷口文紀

Establishment and characterization of reversibly immortalized ovarian epithelial cell lines using the Sendai virus

使用仙台病毒建立可逆永生化卵巢上皮细胞系并对其进行表征

• 发表时间: 2022
• 作者: Hiroaki Komatsu;Masayo Okawa;Kohei Hikino;Yuki Iida;Daiken Osaku;Akiko Kudoh; Jun Chikumi;Shinya Sato;Tetsuro Oishi;Fuminori Taniguchi;Tasuku Harada
• 通讯作者: Tasuku Harada

Establishment of Sendai virus-mediated reversibly immortalized ovarian cell lines from normal and BRCA-1/2 mutation

仙台病毒介导的正常和 BRCA-1/2 突变的可逆永生化卵巢细胞系的建立

• 发表时间: 2022
• 作者: Hiroaki Komatsu;Yasuhiro Kazuki;Kanako Kazuki;Masayo Okawa;Kohei Hikino;Yuki Iida;Mayumi Sawada;Masayo Hosokawa;Akiko Kudoh;Jun Chikumi;Shinya Sato;Fuminori Taniguchi
• 通讯作者: Fuminori Taniguchi