XI型コラーゲン分子の軟骨及び非軟骨細胞における特異的発現機構の解析

XI型胶原分子在软骨和非软骨细胞中的特异性表达机制分析

基本信息

批准号：
07671593
负责人：
吉岡秀克
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671593/
关键词：
コラーゲン遺伝子発現軟骨細胞細胞外マトリックス

项目摘要

私たちはヒトコラーゲンα1(XI)鎖のcDNAプローブを用いて、クロスハイブリダイゼーション法にて重視するマウスα1(XI)鎖をコードするcDNAを得て、その全一次構造を決定した。その結果、予想されるマウスproα1(XI)鎖のアミノ酸は1769個であり、そのN末に35個のシグナルペプチドが存在した。ヒトとのアミノ酸レベルのホモロジーは93%であり、N末、中央螺旋部及びC末の領域構造、N-及びC-プロペプチドのシステイン、及び架橋に関与するリジン等の重要な構造はすべて保持されていた。わずかにマウスのN-プロペプチドにおいてアミノ酸が一個少ないのみであった。一方、このcDNAプローブを使用し、マウス胎児期における発現をノーザンブロット法、RT-PCR法及びin situ hybridization法で調べた。その結果、RT-PCR法を用いると11日目胎児にはすでにこの遺伝子の発現がみられた。ノーザンブロット法ではヒトと同様に7.3kb及び6.3kbの転写産物がみられ、18日目胎児では軟骨組織ばかりでなく、脳、皮膚、頭蓋骨の非軟骨組織でも発現していた。さらに、in situ hybridizationを行うと、これらの組織に発現が認められたばかりでなく、心臓弁部、舌骨格筋、大動脈平滑筋、腸管平滑筋、歯芽、耳小胞等にも発現がみられ、この遺伝子が軟骨組織ばかりでなく、広く非軟骨組織にも発現していることが証明された。さらに、N-プロペプチド部分はヒト同様、塩基性、酸性及び短い螺旋領域よりなっていたが、酸性領域をコードするエクソンは胎児の軟骨や頭蓋骨においては複雑な選択的スプライシングを受けており、この現象が内軟骨性骨化或は膜性骨化過程に関与している可能性が示唆された。

使用人类胶原蛋白α1（XI）链的cDNA探针，我们获得了编码小鼠α1（XI）链的cDNA，这是通过跨杂交的重要性，并确定了它的总主要结构。结果，小鼠Proα1（XI）链中有1769个氨基酸，在N末端存在35个信号肽。与人类的氨基酸水平同源性为93％，所有重要的结构，例如N末端，螺旋中心和C末端区域结构，N-和C肽的半胱氨酸以及涉及交联的赖氨酸的半胱氨酸。用一个氨基酸的小鼠N-肽仅略有下降。另一方面，使用此cDNA探针，使用Northern blotting，RT-PCR和原位杂交研究了小鼠胎儿中的表达。结果，当使用RT-PCR时，在第11天的胎儿中已经观察到了该基因的表达。北印迹方法显示7.3 kb和6.3 kb的转录本，就像人类一样，在第18天以及大脑，皮肤和头骨的非肉毒杆菌的胎儿中表达。此外，当进行原位杂交时，不仅在这些组织中观察到表达，而且在心脏瓣膜，舌骨骨骼肌，主动脉平滑肌，肠平滑肌，肠道芽，牙齿芽，耳托囊泡和其他区域以及其他区域，并且证明这种遗传不仅在Cartilage组织中，而且还证明了这种属的不仅在Cartilange组织中，而且还证明了这种属于Cartilial non-cartil。此外，尽管像人类一样的N-肽部分由基本，酸性和短螺旋区组成，但编码酸性区域的外显子在胎儿的软骨和颅骨中经历复杂的替代剪接，这表明这种现象可能与内cho骨软骨骨化或膜化或膜化或膜化或膜化骨化有关。