軟骨特異的な選択的スプライシング因子に関する研究

软骨特异性选择性剪接因子的研究

• 批准号: 12877227
• 负责人: 吉岡 秀克
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877227/
• 关键词: マイナーコラーゲン; 選択的スプライシング; 軟骨; 細胞外マトリックス; ホモロガスリコンビネーション

1.ミニジーンによる転写産物の解析マウスα1(XI)鎖遺伝子のエクソン5、6A、6B、7、8、9を含むミニジーンを用いて、この領域の選択的スプライシングの実験を行った。使用した細胞はRCS(軟骨肉腫細胞)、A204(横紋筋肉腫細胞)及び293細胞(胎児腎細胞)の三種類である。前二者はα1(XI)鎖発現細胞であり、後者は非発現細胞である。RCSにおいては6B-7-8、6A-7-8、7-8、6B-7、7のパターンが見られた。一方、A204では6A-7-8が見られ、293細胞も同様に6A-7-8のパターンが見られた。これは6A-7-8がこの遺伝子のスプライシングにおける基本型であり、軟骨には特別な組織特異的な因子が必要であることを示唆するものであった。さらにDNA断片を欠失させて作製したコンストラクトを用いた実験を行った。その結果、エクソン7が、軟骨型パターンを生じるのに重要であることがわかった。また、エクソン6Bにおいて、軟骨の特異的発現に重要と思われるプリン・リッチ及びAC・リッチ・エクソンスプライシング・エンハンサー領域が同定できた。今後、この因子の同定を行っていく予定である。2.ホモロガスリコンビネーション法を用いた特定エクソン欠損マウスの作製エクソン6-8の欠損マウスを作製する為にまずES細胞を用いてキメラマウスを作製し、さらにヘテロマウス及びホモの欠損マウスを作製した。このマウスを用いて生化学的、形態学的、発生学的に解析を行っている。又、エクソン6A及び6B領域の機能を解析する為に、エクソン6B及び6A欠損のターゲティングベクターを作製した。今後、これを用いて欠損マウスを作製する予定である。

1. ミ ニ ジ ー ン に よ る product planning write の parsing マ ウ ス alpha 1 (XI) lock heritage 伝 son の エ ク ソ ン 5, 6 a, 6 b, 7, 8, 9 を む ミ ニ ジ ー ン を with い て, こ の の field of sentaku ス プ ラ イ シ ン グ の be 験 を line っ た. Three types of である were used: た RCS(pericarp cells), A204(striated muscle cells), and び293 cells (fetal 児 kidney cells). The first two, であ α1(XI), lock the active cells であ であ, and the latter, <s:1> non-active cells である. RCSにお にお て て て 6b-7-8, 6A-7-8, 7-8, 6B-7, 7 <s:1> パタ <s:1> が が が see られた. One side, A204で <s:1> 6A-7-8が see られ, 293 cells で the same に6A-7-8 <s:1> パタ が が が が られた られた. こ れ は 6 a - 7-8 が こ の posthumous son 伝 の ス プ ラ イ シ ン グ に お け る basic で あ り, cartilage に は specially な tissue specific な factor が necessary で あ る こ と を in stopping す る も の で あ っ た. Lost さ ら に DNA fragment を owe さ せ て cropping し た コ ン ス ト ラ ク ト を with い た be 験 を line っ た. 7 が そ の results, エ ク ソ ン type, cartilage パ タ ー ン を raw じ る の に important で あ る こ と が わ か っ た. ま た, エ ク ソ ン 6 b に お い て, cartilage の specific important と 発 に now think わ れ る プ リ ン · リ ッ チ and び AC · リ ッ チ · エ ク ソ ン ス プ ラ イ シ ン グ · エ ン ハ ン サ が ー field with constant で き た. In the future, the <s:1> <s:1> factor <e:1> will be determined together with を rows って く く to である. 2. ホ モ ロ ガ ス リ コ ン ビ ネ ー シ ョ を ン method with い た specific エ ク ソ ン owe loss マ ウ ス の cropping エ ク ソ ン 6-8 の owe loss マ ウ ス を cropping す る for に ま ず を ES cells with い て キ メ ラ マ ウ ス を as し, さ ら に ヘ テ ロ マ ウ ス and び ホ モ の owe loss マ ウ ス を cropping し た. The を line って る る ウスを can be analyzed using the に of biochemistry, morphology, and biology. Again, エ ク ソ ン の function を 6 a and 6 b び field analytical す る に, エ ク ソ ン 6 b and び owe a loss の タ ー ゲ テ ィ ン グ ベ ク タ ー を cropping し た. In the future, <s:1> れを will be used to make する and determine である by the loss of れを て.

项目成果

Hirakawa S et al: "The brain link Protein-1 (BRALI)"Biochem. Biophys Res.Commun.. 276・3. 982-989 (2000)

Hirakawa S 等人：“脑连接蛋白-1 (BRALI)”Biochem.Biophys Res.Commun. 276·3 (2000)。

Sumiyosi H et al: "Type XIX collagen is expressed transiently during myoblast"Dev.Dynam.. (in press). (2001)

Sumiyosi H 等人：“XIX 型胶原蛋白在成肌细胞期间短暂表达”Dev.Dynam..（正在出版）。

Fujiwara S et al.: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J.Boil.Chem.. 276・16. 13340-13347 (2001)

Fujiwara S等：“Epiplakin，plakin家族的新成员”J.Boil.Chem.. 13340-13347 (2001)。

Fujiwara S et al: "Epiplakin, a novel member of the plakin family"J.Biol.Chem.. (in press). (2001)

Fujiwara S 等人：“Epiplakin，plakin 家族的新成员”J.Biol.Chem..（出版中）。

Iyama K et al: "Differential expression of two exons of the α1(XI) collagen gene"Matrix Biol.. (in press). (2001)

Iyama K 等人：“α1(XI) 胶原蛋白基因的两个外显子的差异表达”Matrix Biol..（出版中）。