精巣に特異的に発現する新規コラーゲン分子に関する研究

睾丸特异性表达的新型胶原蛋白分子的研究

基本信息

批准号：
11877275
负责人：
吉岡秀克
金额：
$ 1.28万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877275/
关键词：
XIX型コラーゲンノックアウトマウス精巣遺伝子発現

项目摘要

マウスゲノムライブラリーよりマウスα1(XIX)コラーゲン鎖をコードするcDNAを用いて遺伝子断片を得た。この遺伝子のエクソン4内にβ-ガラクトシダーゼ及びネオマイシン耐性遺伝子を挿入し、本遺伝子の翻訳が中断されると同時に、β-ガラクトシダーゼに変換されるようにしたコンストラクトを作製した。このコンストラクトを用いてES細胞に導入し、相同組み換え体をゲノムサザン法により選別し、インジェクション法により生殖系キメラを得た。さらにこれを交配させてノックアウトマウスを作製した。ホモ変異マウスは129/SV純系ハウスでは95%離乳前に死亡した。病態の所見は衰弱死で生後より殆ど体重が増加しない。生後1〜3週間生き延びたマウスはその後、体重が増加して、正常マウスと変わらなくなった。病理的所見として、生後、全身に発育遅滞が認められ腎臓、膵臓、肝臓に顕著であった。肝臓の多くには脂肪肝がみられた。しかし、生存し続け成長したマウスにおいては組織学的には変化を認めなかった。129/SV純系のホモ及びヘテロ変異マウスの胎児を用いてホールマウント法でβ-ガラクトシダーゼアッセイを行ったところ、精巣の精細胞管に鮮やかに染色され、組織学的にはセルトリ細胞と思われるところに染色されていた。されに現在融合タンパク質及び合成ペプチドを用いた特異的な抗体を用いた免疫組織化学及びin situ hybridization法を施行している。

使用编码小鼠α1（XIX）胶原蛋白链的cDNA从小鼠基因组文库中获得基因片段。制成了一个构建体，其中将β-半乳糖苷酶和新霉素耐药基因插入该基因的外显子4，并中断该基因的翻译，并同时进行转化为β-半乳糖苷酶。该构建体用于将其引入ES细胞，并通过基因组南部方法选择同源重组，并通过注射获得了胚芽嵌合体。这些进一步繁殖以产生淘汰小鼠。同源物小鼠在129/SV纯房屋中断奶之前死亡95％。病理状况的发现是弱的，而死亡的体重很小。出生后1-3周生存的小鼠随后体重增加，并且与正常小鼠不再相同。病理发现表明，出生后整个身体都观察到发育迟缓，并且在肾脏，胰腺和肝脏中很突出。大多数肝脏都有脂肪肝。但是，在持续生存和生长的小鼠中未观察到组织学变化。使用一种整个安装方法，使用纯129/SV的同型和异源小鼠的胎儿进行β-半乳糖苷酶测定，并在精子细胞管中生动地染色，并在组织学上染色，在似乎是Sertoli细胞的组织学上染色。它目前正在使用融合蛋白和合成肽的特定抗体进行免疫组织化学和原位杂交方法。