赤血球膜蛋白質バンド3による膜流動性の調節機構

红细胞膜蛋白带3对膜流动性的调节

• 批准号: 07672308
• 负责人: 佐藤 幸男
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672308/
• 关键词: 膜蛋白質; バンド3; グリコホリン; 膜流動性; 抗グリコホリン抗体; 蛍光顕微鏡; ESRスペクトル; CDスペクトル

赤血球においてアニオン輸送を司る膜蛋白質バンド3は赤血球の形態や変形能の調節にも関与することが明らかになってきた。一方、赤血球の主要な糖蛋白質であるグリコホリン(GP)も同様の機能を有することやGPに抗体が結合すると赤血球の変形能は低下することが知られている。本研究はバンド3の状態変化と赤血球膜の流動性の変化とがどう関係しているのかを明らかにすることを目的として行なった。試料としてヒト赤血球を用い、抗GPA抗体を添加した場合バンド3の存在状態がどう変化するのかについて検討した。蛍光性色素エオシン-5-マレイミド(EMI)でバンド3をラベルした赤血球について蛍光顕微鏡観察を行なったところ、抗GPA抗体の添加量に応じて赤血球膜表面にEMIのクラスターが観察されるようになった。このとき、赤血球はエキノサイト状に変化した。バンド3が凝集したことを示唆する。また、スピンプローブ剤として5-ドキシルステアリン酸及び16-ドキシルステアリン酸を用いてESRスペクトルを測定し膜流動性について検討したところ、抗GPA抗体の濃度に依存した膜流動性の低下が観察された。この低下は脂質二重層膜の中央付近で顕著であった。コンカナバリンAの添加によっても同様の現象が認められた。バンド3の凝集が流動性に影響を与えることを示す。さらに、EMIをラベルした赤血球ゴ-ストについて誘起円二色性(CD)スペクトルを測定して、バンド3の構造がどのような影響を受けているのかを調べた。バンド3の細胞質側ドメインにEMIをラベルしたゴ-ストでCDスペクトルの変化が観察された。以上の結果に基づいて、抗GPA抗体に起因する膜流動性の低下は次のような機構によると考えた。すなわち、抗GPA抗体がGPと結合するとGPの細胞質側ドメインに構造上の変化が起き、バンド3との親和性が高くなる。このときバンド3の構造も変化し、これに伴い骨格蛋白質によるネットワーク構造が縮退するため膜の流動性が低くなる。このような機構が妥当であるかどうかを検証するため、インサイド-アウトのゴ-ストを調整しさらに検討を加えている。

The membrane proteins involved in erythrocyte transport are related to the regulation of erythrocyte morphology. The main glycoproteins in a single cell are known to bind to the GP and to function similarly to the GP. This study focuses on the relationship between the state of change and the fluidity of erythrocyte membrane. When the sample is used for erythrocytes and anti-GPA antibodies are added, the presence status of the sample is changed. Optical Pigment (EMI): 3. Optical Microscopy: The amount of anti-GPA antibody added to the red blood cell membrane surface causes EMI to be detected. The red blood cells were transformed into red blood cells. 3. The number of cells in each cell is 0. The concentration dependence of anti-GPA antibody on membrane fluidity was observed in the determination of membrane fluidity by ESR. The lower lipid layer is closer to the center. The phenomenon of the addition of a compound A to a compound A is recognized. 3. The aggregation effect on liquidity is shown below. In addition, EMI can be detected in red blood cells and induced dichroism (CD). The structure of the three components can be affected by EMI. The cytoplasmic side of the cell line EMI is detected. The above results are based on the study of the mechanism of low membrane fluidity caused by anti-GPA antibodies. Anti-GPA antibodies bind to GP and have high affinity for GP due to structural changes in the cytoplasmic side of GP. The structure of the membrane was changed, and the fluidity of the membrane was reduced. The organization is in good shape, and it's ready to be adjusted.