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風変わりなブルー銅タンパク質の構造生物無機化学

外来蓝铜蛋白的结构生物无机化学

基本信息

批准号：
16H06940
负责人：
福田庸太
金额：
$ 1.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-08-26 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H06940/
关键词：
生物無機化学金属タンパク質Ｘ線結晶構造解析

项目摘要

Arg-BCPについて、N末Hisタグの後ろにSUMOタグを付加したコンストラクトを構築したところ可溶性タンパク質として発現できたので、結晶化可能な程度にまで精製をすすめ、UV-visスペクトル等のデータを取得した。しかしながら、本研究計画提出直後に、別のグループによってArg-BCPの構造が報告されてしまったため（Hosseinzadeh et al. JACS, 2016）、これ以上の研究遂行を断念した。CinAの大腸菌での大量発現系を構築し、微結晶も得られたが、500 mg/mLという極めて高濃度サンプルが必要であり、結晶素性の改善が困難であった。そこで可溶性を下げる目的と、結晶内での分子接触面積を大きくし結晶化を促進する目的で、マルトース結合タンパク質（MBP）タグをC末端に付加したコンストラクトをあらたに作製した。ところがこのサンプルを用いて結晶化をおこなっても結晶素性の改善には至らなかった。次に、N末端にMBPタグを付加し、さらにフレキシブルな領域を除いたコンストラクトを作製した。このコンストラクトも高純度での精製ができたので、現在結晶化に取り組んでいる。Tan-BCPは膜貫通へリックスを有するが、本研究はBCPドメインに着目するため、まずは、可溶性のタンデムBCPドメインのみを発現・精製した。Arg-BCPと同様にSUMOタグを付加することにより、可溶性タンパク質としての発現を試みたところ、発現量は少ないが、発現自体は確認できた。今後、精製条件や結晶化条件を検討する予定である。

Arg-BCP, N-terminal, post-processing, SUMO, construction, solubility, quality, occurrence, crystallization possibility, refinement, UV-vis, etc. This study proposes a report on the structure of Arg-BCP (Hosseinzadeh et al. JACS, 2016). A large amount of production system of CinA coliform bacteria was constructed, microcrystallization was obtained, 500 mg/mL was extremely high concentration, and improvement of crystallinity was difficult. For the purpose of solubility and crystallization, the molecular contact area should be increased. For the purpose of crystallization, the molecular contact area should be increased.ところがこのサンプルを用いて结晶化をおこなっても结晶素性の改善には至らなかった。Next, N-terminal MBP is added, and the domain of MBP is removed. High purity, high purity. In this study, the soluble BCP was developed and refined. Arg-BCP is similar to SUMO, and soluble in water. The purification conditions and crystallization conditions are discussed in the future.