侵襲性歯周炎の原因候補遺伝子NOD2の機能解析

侵袭性牙周炎候选基因 NOD2 的功能分析

• 批准号: 18H06289
• 负责人: 須藤 毅顕
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-08-24 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18H06289/
• 关键词: NOD2; 侵襲性歯周炎; エクソーム解析; 次世代シークエンサー

2018年度は、過去に同定したNOD2変異の機能解析と他サンプルを用いたゲノム解析を並行して実施した。1.NOD変異型の機能解析/ まず野生型のNOD2遺伝子配列に対して、Mutagenesis 法にて特定部位変異遺伝子導入を行った。そして、変異導入した NOD2 領域を発現ベクターに組み替えた。作成した侵襲性歯周炎に特異的な5種類のNOD2変異型プラスミドをHEK293細胞株に導入し、細菌の構成因子であるムラミルジペプチドに対する応答性をルシフェラーゼアッセイ法にて解析した。その結果、いくつかのNOD2変異型では野生型と比較して、免疫シグナルへの応答強度、応答のピークや持続時間が変化していることを確認した。今後はNOD2変異型の結合パートナーや細胞質内での挙動の変化を詳細に解析していく。2.さらなる罹患者サンプルを用いたゲノム解析/ (1) NOD2遺伝子の他集団における変異解析/ 日本人以外の集団における侵襲性歯周炎罹患者に対してNOD2領域のディープシークエンス解析を行い、変異の有無を検討する。Abant Izzet Baysal大学との共同研究により、トルコ人集団における侵襲性歯周炎罹患者のDNAサンプルを90サンプル使用する。東京医科歯科大学の倫理審査は受理されており、Abant Izzet Baysal大学にてDNA抽出が実施されたのち、NOD2の全プライマーセットを用いてシークエンスを実施予定である。(2) 新たな家系例を用いた全エクソーム解析/ 侵襲性歯周炎罹患者を複数含む新たに収集された家系を用いて全エクソーム解析を行い、NOD2以外の新たな遺伝子変異を探索する。当大学バイオリソースセンターを利用したサンプリングを開始しており、サンプリングの中から家系例を見出した。今後、次世代シークエンサーを用いてライブラリ作成、シークエンスによる塩基配列の取得を行う。

In 2018, the same NOD2 function analysis and other service analysis were carried out in parallel 1. Function analysis of NOD variant/wild type NOD2 gene alignment, Mutagenesis method for specific site variant gene introduction In addition, the NOD2 domain is now being developed. To create five types of invasive periodontitis specific NOD2 heteromorphic factors introduced into HEK293 cell line, bacterial constitutive factors were analyzed by the method of response. Results: NOD2 heteromorphism was confirmed by wild-type comparison, immune response intensity, response duration. In the future, NOD2 heteromorphism will be analyzed in detail. 2. The analysis of patients with aggressive periodontitis/ (1) The analysis of other groups of NOD2 gene/The analysis of invasive periodontitis in groups other than Japanese/The analysis of patients with aggressive periodontitis in NOD2 domain/The analysis of different groups/The analysis of different groups/The analysis of different groups in NOD2 domain. Abant Izzet Baysal University Joint Study on the Use of DNA in Patients with Aggressive Periodontitis Ethics review of Tokyo Medical and Dental University accepted the application of DNA extraction from Abant Izzet Baysal University, and the application of NOD2 was determined. (2)New family examples are used to analyze the complete set of problems/invasive periodontitis sufferers. Multiple new family examples are used to analyze the complete set of problems. New family examples other than NOD2 are used to explore differences. When the university is in the middle of the game, it is possible to use the game to start the game. In the future, the next generation will be used to create and acquire the base array.