权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

過剰歯由来iPS細胞によるバイオリサイクル研究システムの研究

利用多余的牙源iPS细胞进行生物循环研究系统的研究

基本信息

批准号：
22890147
负责人：
齋藤陽子
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22890147/
关键词：
再生医学バイオリサイクル歯 iPS細胞

项目摘要

本研究は過剰歯歯髄からiPS細胞を樹立することを目的に、平成22年度に遺伝子導入のためのプラスミドの増幅を行った。続いて患者から採取した過剰埋伏歯の歯髄細胞を、コラゲナーゼを用いて初代培養し、30日間培養維持した。また、iPS細胞樹立に必要不可欠なFeeder細胞に関し、複数の異なる薬物耐性を持つFeeder細胞の樹立を試みた。CMVプロモータ下にHygromycin、Puromycin、NeomycinのいずれかとBleomycinの2種類の薬剤耐性遺伝子を持つプラスミドを作成しこれら3つのプラスミドを、それぞれSTO細胞へリポフェクション法にて遺伝子導入を行った。遺伝子導入後より2種類の薬剤にて遺伝子導入細胞の選択を行い、2か月間薬剤投与を続けた。樹立した細胞のES細胞未分化維持能を評価するため、Mitomycin C処理した樹立細胞上にて、muse ES細胞を播種・培養し、継代後のES細胞の形態学的変化について評価を行った。薬剤投与にて選別された、Hygromycin/Bleomycin耐性STO細胞(SHB細胞)、Puromycin/Bleomycin耐性STO細胞(SPB細胞)、Neomycin/Bleomycin耐性STO細胞(SNB細胞)を樹立した。いずれの細胞もSTO細胞とほぼ同じ細胞形態をしており、長期間培養維持が可能(18継代まで確認)であった。また、樹立細胞上に播種されたES細胞については、形態学的には変化は認められず、良好な継代維持が可能であった。平成23年度には上記の手法を組み合わせ、過剰歯歯髄からiPS細胞を樹立するための直接的な実験を開始したが、本研究をベースとした研究が若手研究(B)に採用となり、本研究の廃止申請に至った。

The aim of this study was to increase the level of expression of iPS cells in vitro and in vivo in 2002. In addition, the patient's primary culture and 30-day culture were maintained. In addition, the establishment of iPS cells is necessary for the establishment of Feeder cells, and the establishment of Feeder cells is tested for multiple different drug tolerance. The two kinds of drug resistance genes of Hygromycin, Puromycin, Neomycin and Bleomycin were selected and tested under CMV infection, and the gene introduction was carried out by STO cell culture. After gene introduction, two kinds of agents were selected for gene introduction into cells, and two kinds of agents were injected into cells. Evaluation of the ability to maintain undifferentiated ES cells in culture, mitomycin C treatment, seeding, culture, and morphological transformation of ES cells after passage In addition, hygromycin/bleomycin resistant STO cells (SHB cells), puromycin/bleomycin resistant STO cells (SPB cells), and neomycin/bleomycin resistant STO cells (SNB cells) were established. It is possible to maintain STO cells in culture for a long time (18 generations). The cells are seeded on the stem cells, morphologically transformed, and well maintained. In 2003, the study was conducted on the basis of a combination of techniques and methods.