免疫チェックポイント分子 (CTLA-4) の作用から探る新規歯周治療の確立

基于免疫检查点分子（CTLA-4）作用的新型牙周治疗方法的建立

• 批准号: 22K21071
• 负责人: 小谷地 咲
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Tokyo Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K21071/
• 关键词: CTLA-4; 歯槽骨吸収; 破骨細胞分化; 歯周炎

歯周病は多因子性疾患であることから，病態の理解や根治的な治療法の確立は困難を極めている。我々は，歯周病の病態解明と新規治療法の開発のため，免疫チェックポイント機構と歯周病の関連について検討を行ってきた。その成果として，免疫チェックポイント分子の一つである細胞傷害性Tリンパ球関連抗原4 (CTLA-4) が破骨細胞分化を抑制し，歯周炎マウスモデルにおける歯槽骨吸収量を減少させることを明らかにした。しかし，そのメカニズムについては未だ不明な点が多い。そこで本研究は，CTLA-4の詳細な破骨細胞分化調節メカニズムの検討と，局所応用を行った際の歯周組織破壊への影響の評価を行い，新規歯周治療の開発の足掛かりとすることを目的とした。2022年度は，CD80/86－/－マウスにおいてCTLA-4が歯槽骨吸収に及ぼす影響を評価するため，まずは野生型を用いて絹糸結紮歯周炎マウスモデルの確立を行った。また、in vitroではPP2A発現抑制下での，CTLA-4の破骨細胞分化への影響を評価した。siRNAを用いてPP2A発現を抑制したRAW 264.7細胞に，RANKLとCTLA-4-Igを添加した。添加後48時間，96時間で，qRT-PCRにて破骨細胞分化マーカー (Macrophage-colony stimulating factor, Carbonic anhydrase II, Cathepsin K, Tartrate-resistant acid phosphatase) 発現を評価した。siRNA 導入は細胞生存率に有意な影響を与えないことを確認した。PP2A siRNA 群では，CTLA-4-Ig 添加によるCathepsin K, Trap の発現抑制は確認されなかった。これより，PP2A 発現の調節は，CTLA-4-Ig による破骨細胞分化抑制メカニズムの一つであることが示唆された。

Periodical disease is a multifactorial disease, and it is extremely difficult to understand the disease and establish a cure. We believe that the development of new treatments for dental diseases and the development of immune mechanisms for the detection of dental diseases are important. The results showed that cytotoxic T cell associated antigen 4 (CTLA-4) inhibited osteoclast differentiation and decreased alveolar bone uptake in periodontitis. It's not clear what's going on, but it's not clear what's going on. This study aims to investigate the detailed regulation of osteoclast differentiation by CTLA-4, evaluate the effects of local administration on peridental tissue destruction, and develop new guidelines for the development of peridental therapy. In 2022, CD80/86-/-was used to evaluate the effect of CTLA-4 on dental bone absorption and development, and to establish a wild-type dental ligament. The effect of CTLA-4 on osteoclast differentiation was evaluated under the inhibition of PP2A expression in vitro. PP2A expression was inhibited by siRNA in RAW 264.7 cells, and RANKL and CTLA-4-Ig were added. 48 and 96 hours after addition, qRT-PCR was used to evaluate the development of osteoclast differentiation factors (Macrophage-colony stimulating factor, Carbonic anhydrase II, Cathepsin K, Tartrate-resistant acid phosphatase). siRNA-induced cell survival was confirmed PP2A siRNAs were added to Cathepsin K, Trap inhibition was confirmed. PP2A expression is regulated by CTLA-4-Ig, which inhibits osteoclast differentiation.

项目成果

The potential mechanism of CTLA-4-Ig-mediated osteoclast differentiation

CTLA-4-Ig介导破骨细胞分化的潜在机制

• 发表时间: 2022
• 作者: Saki Nakane-Koyachi;Kentaro Imamura;Tasuku Murakami;Rio Hisanaga;Kazuyuki Ishihara;Atsushi Saito
• 通讯作者: Atsushi Saito