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減数分裂進行速度を調節する新規因子Neuregulin1の解析

Neuregulin1（一种调节减数分裂进展速率的新因子）的分析

基本信息

批准号：
24880026
负责人：
川島一公
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-08-31 至 2014-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24880026/
关键词：
卵 Neuregulin1 顆粒膜細胞卵丘細胞 Floxマウス Cyp19-Creマウス Connexin43

项目摘要

生殖組織のCyp19発現細胞特異的にNRG1遺伝子をノックアウト可能なNrg1^<flox/flox>Cyp19-Creを用いて,雌個体で共に産子数が減少するという形質の分子メカニズムの一端を明らかにすることに成功した.雌個体は,平均産子数は有意に低く,卵はM2停止能を欠失していた.しかし,NRG1を欠損している細胞は顆粒層細胞(GC)であること,NRG1の受容体であるErbB2/3は卵には発現していないことから,NRG1の刺激を受けたGCが何らかの因子を分泌し,卵に影響を及ぼしているのではないかと考えられた.通常,田刺激後,排卵までに16時間を要するが,その中から影響を及ぼす時間を特定するために,卵の減数分裂進行速度を観察した.結果,NRG1ノックアウトマウスは,LH刺激2時間で既に減数分裂を再開させていた.これらの結果から,LH刺激後に分泌されるNRG1は,遺伝子発現を介さず,シグナル系で卵に作用している可能性が示唆された.以上の結果から,シグチル系のハブであるPKA,PKB,PKCの活性を測定したところ,PKC活性が野生型と比較して有意に増加していた.次に体外培養を用いて,PKC上流のCa活性を測定したところ,NRG1存在化で,Caの増加が抑制されていた.このCa→PKC経路は,減数分裂再開を誘起する卵と顆粒層細胞の細胞接着部位に存在する小分子交換タンパクConnexin43(Cx43)の閉鎖を誘起することが知られている.したがって,Cx43の閉鎖を示すリン酸化特異的抗体を用いて野生型とノックアウト型をWestern Blottingによって比較したところ,ノックアウトマウスでリン酸化されたCx43の強いシグナルがえられた.これらの結果からCa→PKC→Cx43閉鎖が卵の減数分裂に及ぼしている可能性が示唆されたため,PKCの抑制剤を投与したマウスで減数分裂速度を観察したところ,NRG1ノックアウトマウスは野生型と同様の進行速度を示した.これらの結果は,既存の卵体外培養家で問題となっていた,減数分裂の早期再開による卵の低発生率の原因一端を解明し,改善が可能になることを示唆している.今後は,家畜卵の体外培養系にNRG1を添加し.その発生率を検討していく.

Cyp19 in reproductive tissue shows cell-specific NRG1 gene expression and possible Nrg1^<f lox/flox>Cyp19-Cre is used, the number of offspring produced by the female individual is reduced, and the quality of the offspring is reduced.のmolecule メカニズムのOne end を明らかにすることにsuccess した. Female individual は, average number of offspring は intentional にlow く, ovum M2 cessation energy is lost, NRG1 cells are damaged, granular layer cells (GC) )であること,NRG1のReceiverであるErbB2/3はOVAには発成していないことから,N The stimulation of RG1 is affected by the secretion of GC and GC factors and the influence of ovum and EGFR. Usually, after field stimulation, the ovulation time is 16 seconds, and the ovulation time is affected by the stimulation.をSpecific するために, Egg の meiosis progress speed を観看した. Result, NRG1 ノックアウトマウスは, LH stimulation 2 time is not enough to restart meiosis. It is not the result of LH stimulation. It is not secreted after LH stimulation.れるNRG1は, 缝子発 appear さず, シグナル system でEGに Effect している POSSIBILITY がINDICATION された. The above results are the same as the determination of the activity of PKA, PKB, and PKC of the シグチ-type PKA, PKB, and PKC. PKC activity is compared with the wild type and is intentionally increased. The time is used for in vitro culture and PKC upstream is used. aActivity measurement, NRG1 presence analysis, Ca addition, inhibition, Ca→PK C 経路は, meiosis re-opening を induces ovum and granulosa layer cells, exists at the cell junction site, する small molecule exchange タンパクConnexin43(Cx43)のclosureをinducingすることが知られている.したがって, Antibodies specific for Cx43 blockade and acidification are used in Western BlottingによってComparisonしたところ,ノックアウトマウスでリン acid化されたCx43の强いシグナルがえられた.これらのRESULTからCa→PK C→Cx43 The possibility of atresia and meiosis, PKC's inhibitory effects on meiosis speed, NRG 1ノックアウトマウスはwild typeと同様の progress speedをshowした.これらのresultは, Problems with existing in vitro culture of eggs The reason for the low incidence rate has not yet been clarified, and improvement is possible in the future.は, the in vitro culture system of domestic animal eggs has been added with NRG1. The growth rate has been improved.