神経におけるタンパク質合成制御と自閉症の発症機構の解析

神经蛋白质合成控制与自闭症发病机制分析

• 批准号: 26890008
• 负责人: 池内 与志穂
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-08-29 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26890008/
• 关键词: 神経; タンパク質合成; 自閉症

研究活動をスタートするための準備と環境整備を行い、実験系を確立した。特に、iPS細胞における遺伝子改変モデルの作製の実験系を立ち上げ、タンパク質合成の制御機構と自閉症に関連する検体の作成と解析を始めている。すでに確立され広く用いられている正常なiPS細胞の遺伝子を改変することによって疾患モデル細胞を作成するために、遺伝子改変のために用いられるCas9およびガイドRNAを発現するプラスミドをエレクトロポレーション法によってiPS細胞内に導入する方法を条件検討した。電圧、パルス長、細胞接着基質などの検討によって遺伝子導入効率を向上することが出来た。しかし、標的遺伝子によっては遺伝子を改変することによってiPS細胞の正常な増殖を阻害することが明らかになり、本手法を汎用的にモデル細胞の作成のために使用するためには、対処法の必要性が示唆された。また、マウス初代培養神経におけるタンパク質相互作用解析の実験系を確立した。マウス胎児の大脳皮質から得た初代培養神経にレンチウイルスを用いてエピトープタグを融合した標的タンパク質の遺伝子を導入し、エピトープタグを用いて免疫沈降することによって標的タンパク質を含むタンパク質複合体を精製し、解析することができた。並列的に多数の標的タンパク質を解析し、解析結果を相互比較することによって、バックグラウンドタンパク質を除外して有意に標的タンパク質と結合する因子を同定する手法として今後活用する予定である。

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项目成果

神経の形態形成と移動を制御するTSC1/2-mTORシグナル経路の神経特異的分子機構

控制神经元形态发生和迁移的 TSC1/2-mTOR 信号通路的神经元特异性分子机制

• 发表时间: 2014
• 作者: 小松直貴;松田道行;青木一洋;小松直貴;池内与志穂
• 通讯作者: 池内与志穂