神経におけるタンパク質合成制御と自閉症の発症機構の解析

研究活動をスタートするための準備と環境整備を行い、実験系を確立した。特に、iPS細胞における遺伝子改変モデルの作製の実験系を立ち上げ、タンパク質合成の制御機構と自閉症に関連する検体の作成と解析を始めている。すでに確立され広く用いられている正常なiPS細胞の遺伝子を改変することによって疾患モデル細胞を作成するために、遺伝子改変のために用いられるCas9およびガイドRNAを発現するプラスミドをエレクトロポレーション法によってiPS細胞内に導入する方法を条件検討した。電圧、パルス長、細胞接着基質などの検討によって遺伝子導入効率を向上することが出来た。しかし、標的遺伝子によっては遺伝子を改変することによってiPS細胞の正常な増殖を阻害することが明らかになり、本手法を汎用的にモデル細胞の作成のために使用するためには、対処法の必要性が示唆された。また、マウス初代培養神経におけるタンパク質相互作用解析の実験系を確立した。マウス胎児の大脳皮質から得た初代培養神経にレンチウイルスを用いてエピトープタグを融合した標的タンパク質の遺伝子を導入し、エピトープタグを用いて免疫沈降することによって標的タンパク質を含むタンパク質複合体を精製し、解析することができた。並列的に多数の標的タンパク質を解析し、解析結果を相互比較することによって、バックグラウンドタンパク質を除外して有意に標的タンパク質と結合する因子を同定する手法として今後活用する予定である。

研究活動をスタートするための準備と環境整備を行い、実験系を確立した。特に、iPS細胞における遺伝子改変モデルの作製の実験系を立ち上げ、タンパク質合成の制御機構と自閉症に関連する検体の作成と解析を始めている。すでに確立され広く用いられている正常なiPS細胞の遺伝子を改変することによって疾患モデル細胞を作成するために、遺伝子改変のために用いられるCas9およびガイドRNAを発現するプラスミドをエレクトロポレーション法によってiPS細胞内に導入する方法を条件検討した。電圧、パルス長、細胞接着基質などの検討によって遺伝子導入効率を向上することが出来た。しかし、標的遺伝子によっては遺伝子を改変することによってiPS細胞の正常な増殖を阻害することが明らかになり、本手法を汎用的にモデル細胞の作成のために使用するためには、対処法の必要性が示唆された。また、マウス初代培養神経におけるタンパク質相互作用解析の実験系を確立した。マウス胎児の大脳皮質から得た初代培養神経にレンチウイルスを用いてエピトープタグを融合した標的タンパク質の遺伝子を導入し、エピトープタグを用いて免疫沈降することによって標的タンパク質を含むタンパク質複合体を精製し、解析することができた。並列的に多数の標的タンパク質を解析し、解析結果を相互比較することによって、バックグラウンドタンパク質を除外して有意に標的タンパク質と結合する因子を同定する手法として今後活用する予定である。