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Functional compatibility of Rho family genes in vivo.

Rho家族基因在体内的功能相容性。

基本信息

批准号：
15570145
负责人：
ARAKI Masatake
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15570145/
关键词：
Rhoa gene trap small GTPase geo Knock-in mouse ジーントラップノックアウトマウス

项目摘要

We have developed the exchangeable gene trap system. The reporter gene, β-geo, can be replaced into any other DNA of interest through Cre-mutant lox site-specific recombination.The Ayu17-52 mouse line is the Rhoa gene knockout mouse line produced by the exchangeable gene trap method. Rho family proteins are Ras-related small GTPases that regulate a variety of cellular processes. Its function in vivo is still unclear.The purpose of this research project is to clear up the functional compatibility of Rho family genes in vivo.Heterozygous β-geo(Rhoa^<+/geo>) mice showed severe growth retardation, and most of them died in a few weeks after birth.At the first step, Rho1 gene of yeast, one of homologues of mouse Rhoa, was knocked in the trap allele instead of the β-geo gene. Heterozygous Rho1 knock in mice showed no growth retardation. At the second step, human skeletal muscle α actin(HSA) gene promoter was knocked in the trap allele instead of the β-geo gene. At the third step, mouse Rhoc cDNA was knocked in the trap allele instead of the β-geo gene. These replacements could rescue the phenotype of heterozygote. Finaly, we have tested a replacement of reporter gene from β-geo to EGFP.After replacement, the change of the phenotype was observed, too. The phenotype was disappeared completely in heterozygous EGFP(Rhoa^<+/BGFP>) mice. Since the both of β-geo and EGFP gene are expressed quite strongly and ubiquitously, the strong expression of β-geo protein might affect the phenotype severely.Homozygous EGFP(Rhoa^<EGFP/EGFP>) mice show embryonic lethality like as homozygous Rho1 knock in (Rhoa^<Rho1/Rho1>) mice. It means that this is the phenotype of Rhoa protein deficiency. Now, we are investigating if Rhoc replacement might rescue the phenotype of homozygote.

我们开发了可交换的基因捕获系统。报告基因β-geo可以通过Cre突变lox位点特异性重组替换到任何感兴趣的DNA中，Ayu 17 -52小鼠系是通过可交换基因诱捕法产生的Rhoa基因敲除小鼠系。Rho家族蛋白是Ras相关的小GTP酶，其调节多种细胞过程。本研究的目的是阐明Rho家族基因在体内的功能相容性，杂合子β-geo（Rhoa^<+/geo>）小鼠表现出严重的生长迟缓，大多数在出生后几周内死亡，首先敲除小鼠Rhoa同源物之一的酵母Rho 1基因的trap等位基因，以替代β-geo基因。杂合Rho 1敲除小鼠未表现出生长迟缓。第二步，敲除人骨骼肌α肌动蛋白（HSA）基因启动子中的trap等位基因，而不是β-geo基因。在第三步中，敲除小鼠Rhoc cDNA中的陷阱等位基因而不是β-geo基因。这些替换可以挽救杂合子的表型。最后，我们将报告基因从β-geo替换为EGFP，观察替换后细胞表型的变化。在杂合EGFP（Rhoa^<+/BGFP>）小鼠中，表型完全消失。由于β-geo基因和EGFP基因都在小鼠体内广泛表达，因此β-geo蛋白的高表达可能会严重影响其表型，纯合EGFP（Rhoa^<EGFP/EGFP>）小鼠表现出与纯合Rho 1敲入（Rhoa^<Rho 1/Rho 1>）小鼠相似的胚胎致死性。这意味着这是Rhoa蛋白缺乏症的表型。现在，我们正在研究Rhoc替换是否可以挽救纯合子的表型。

项目成果

期刊论文数量（16）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

これを守らないと罰せられます〜2月19日施行! 遺伝子組換え生物等規制法〜

不遵守的话会受到惩罚的～2月19日实施转基因生物管理法～

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
細胞工学 23(4)
影响因子：
0
作者：
Taniwaki;T.;Araki.M.;et al.;荒木正健
通讯作者：
荒木正健

Characterization of an exchangeable gene trap using pU-17 carrying a stop codon-bgeo cassette.

使用携带终止密码子-bgeo 盒的 pU-17 表征可交换基因陷阱。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Dev.Growth Differ. 47
影响因子：
0
作者：
Taniwaki;T.;Araki.M.;et al.
通讯作者：
et al.

Generation of high-affinity antibody against T cell-dependent antigen in ganp gene-transgenic mouse.

在 ganp 基因转基因小鼠中产生针对 T 细胞依赖性抗原的高亲和力抗体。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Journal of Immunology 174・8
影响因子：
0
作者：
N.Sakaguchi;T.Kimura;S.Matsushita;S.Fujimura;J.Shibata;M.Araki;T.Sakamoto;C.Minoda;K.Kuwahara
通讯作者：
K.Kuwahara

RNA干渉は鶏心筋の一次培養細胞の筋蛋白質トロポニンTの発現を抑制した

RNA 干扰抑制原代培养鸡心肌细胞中肌肉蛋白肌钙蛋白 T 的表达。